【摘要】：目的觀察miR-16在葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞中的表達(dá)變化,及其對(duì)細(xì)胞增殖的影響。方法培養(yǎng)葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞系SP6.5及正常葡萄膜黑色素細(xì)胞系UM-U-95。采用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)SP6.5細(xì)胞、UM-U-95細(xì)胞中的miR-16。將SP6.5細(xì)胞分為miR-16組、對(duì)照組和miR-16抑制劑組。其中miR-16組轉(zhuǎn)染miR-16 mimics,對(duì)照組轉(zhuǎn)染scramble(陰性對(duì)照序列),miR-16抑制劑組轉(zhuǎn)染miR-16抑制劑。分別于轉(zhuǎn)染24、48、72 h采用MTT法測(cè)算各組相對(duì)活細(xì)胞百分比;轉(zhuǎn)染72 h后采用克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)算克隆形成率;轉(zhuǎn)染72h后,采用Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞中的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2(FGF2)蛋白。結(jié)果 SP6.5細(xì)胞、UM-U-95細(xì)胞中miR-16相對(duì)表達(dá)量分別為0.22±0.02、1.0,SP6.5細(xì)胞中miR-16的相對(duì)表達(dá)量低于UM-U-95細(xì)胞(P0.01)。轉(zhuǎn)染后48、72 h miR-16組相對(duì)活細(xì)胞百分比低于對(duì)照組,miR-16抑制劑組相對(duì)活細(xì)胞百分比高于對(duì)照組(P均0.05)。轉(zhuǎn)染72 h后,miR-16組、對(duì)照組、miR-16抑制劑組克隆形成率分別為20.15%±2.53%、42.63%±4.42%、68.36%±6.25%,miR-16組克隆形成率低于對(duì)照組,miR-16抑制劑組克隆形成率高于對(duì)照組(P均0.05)。miR-16組、對(duì)照組、miR-16抑制劑組細(xì)胞中FGF2蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為0.27±0.02、1.0、5.64±0.58,miR-16組FGF2蛋白相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組,miR-16抑制劑組FGF2蛋白相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組(P均0.05)。結(jié)論 miR-16在葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)。miR-16過(guò)表達(dá)可抑制葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞增殖、降低克隆形成率,抑制miR-16表達(dá)可增強(qiáng)葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞的增殖能力。miR-16對(duì)葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞增殖能力的影響可能與調(diào)節(jié)FGF2蛋白表達(dá)有關(guān)。
[Abstract]:Objective to observe the expression of miR-16 in uveal melanoma cells and its effect on cell proliferation. Methods cultured uveal melanoma cell line SP6.5 and normal uveal melanoma cell line UM-U-95. Detection of miR-16. in SP6.5 cells and UM-U-95 cells by Real-time quantitative PCR SP6.5 cells were divided into miR-16 group, control group and miR-16 inhibitor group. MiR-16 group transfected miR-16 mimics, control group with scramble (negative control sequence), miR-16 inhibitor group transfected miR-16 inhibitor. The relative percentage of living cells in each group was calculated by MTT method at 72 h after transfection, and the colony formation rate was calculated by clone formation experiment 72 h after transfection. After 72 hours of transfection, fibroblast growth factor 2 (FGF2) protein was detected by Western blotting assay. Results the relative expression of miR-16 in SP6.5 cells and UM-U-95 cells was 0.22 鹵0.02 ~ 1.0P ~ (6.5), respectively, which was lower than that in UM-U-95 cells (P0.01). The percentage of relative living cells in miR-16 group was lower than that in control group at 48 ~ 72 h after transfection, and the relative live cell percentage in miR-16 inhibitor group was higher than that in control group (P < 0. 05). After 72 hours of transfection, the clone formation rate of miR-16 group, control group and miR-16 inhibitor group was 20.15% 鹵2.53% 鹵42.63% 鹵4.42% respectively. The clone formation rate of miR-16 group was lower than that of control group (68.36% 鹵6.25%). The relative expression of FGF2 protein in miR-16 group, miR-16 inhibitor group and miR-16 inhibitor group was 0.27 鹵0.021.0 鹵5.64 鹵0.58, respectively. The relative expression of FGF2 protein in miR-16 group was lower than that in control group, and the relative expression of FGF2 protein in miR-16 inhibitor group was higher than that in control group (P 0.05). Conclusion the expression of miR-16 is down-regulated in uveal melanoma cells, and the overexpression of miR-16 can inhibit the proliferation of uveal melanoma cells and decrease the clone formation rate. Inhibiting the expression of miR-16 could enhance the proliferative ability of uveal melanoma cells. The effect of miR-16 on the proliferation of uveal melanoma cells may be related to the regulation of FGF2 protein expression.
【作者單位】： 武漢大學(xué)中南醫(yī)院;
【分類(lèi)號(hào)】：R739.7

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本文編號(hào)：2359063