【摘要】：目的:高強(qiáng)度聚焦超聲(High Intensity Focused Ultrasound,HIFU)作為一種新興的體外無創(chuàng)治療技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于婦產(chǎn)科、肝膽外科、泌尿外科等各個醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,尤其是臨床實(shí)體腫瘤的治療。20世紀(jì)80-90年代的臨床實(shí)驗中發(fā)現(xiàn),高強(qiáng)度聚焦超聲在眼科領(lǐng)域中可以用于治療青光眼疾病,然而其運(yùn)用于眼科治療相關(guān)疾病是否具有安全性罕見報道。本課題組早期研究中已證實(shí)HIFU可以通過改變活體兔眼角膜的屈光狀態(tài)以矯正老視,因而本研究探討高強(qiáng)度聚焦超聲輻照活體兔眼角膜后對視網(wǎng)膜和視神經(jīng)的影響,為HIFU應(yīng)用于活體角膜臨床治療的安全性提供理論支持。方法:1.HIFU輻照活體兔眼角膜動物模型的構(gòu)建:設(shè)置CZF型超聲治療儀治療參數(shù)為功率1w、頻率10.20MHz、脈沖1000Hz、焦距4.5mm、輻照時間6S(電動機(jī)以10r/min速度帶動超聲波治療頭勻速旋轉(zhuǎn)1周所需時間)、輻照環(huán)直徑約9mm、輻照方式以圓環(huán)狀聚焦定位輻照活體兔眼角膜基質(zhì),制作角膜焦域環(huán)。選取7只健康成年且眼部無疾患新西蘭大白兔,每只實(shí)驗兔右眼標(biāo)記為實(shí)驗組,左眼標(biāo)記為對照組。實(shí)驗組用HIFU以圓環(huán)狀定位輻照角膜基質(zhì),對照組未行任何處理作為正�？瞻讓φ�。于術(shù)畢后1、7、14、30、60、90天行裂隙燈顯微鏡下觀察拍照;隨機(jī)選取5只于術(shù)前、術(shù)畢后1、7、14、30、60、90天行自動驗光儀測量術(shù)眼角膜曲率。2.HIFU輻照活體兔眼角膜后對視網(wǎng)膜的組織形態(tài)學(xué)及生物學(xué)變化觀察:41只健康新西蘭大白兔中隨機(jī)挑取36只(共72眼),將分別于術(shù)畢后1、7、14、30、60、90天隨機(jī)抽取6只(12眼)處死后摘除眼球取材固定,光鏡下觀察視網(wǎng)膜細(xì)胞層數(shù)和各層細(xì)胞排列情況以及視神經(jīng)組織形態(tài)變化;透射電鏡下觀察術(shù)后視神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu);并用免疫組化法檢測視網(wǎng)膜中勿動蛋白(Nogo-A)的活性表達(dá);原位末端標(biāo)記法(Td T-mediated d UTP nick-end labeling,TUNEL)檢測視網(wǎng)膜各層細(xì)胞凋亡的情況;檢測視網(wǎng)膜組織中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。余5只作為OCT組,分別于術(shù)前、術(shù)后1、7、14、30、60、90天行光學(xué)相干斷層掃描儀(Optical Coherence Tomography,OCT)掃描觀察視網(wǎng)膜形態(tài)并測量視網(wǎng)膜厚度值。結(jié)果:1.成功構(gòu)建HIFU輻照活體兔眼角膜動物模型。2.裂隙燈觀察結(jié)果:HIFU輻照活體兔眼角膜后即刻角膜輻照范圍上皮出現(xiàn)部分缺損,基質(zhì)層形成灰白色焦域環(huán),與周邊正常組織分界清楚,熒光素鈉染色可見所對應(yīng)部位著染,輻照焦域環(huán)于術(shù)后7天逐漸變淡直至消失,熒光素鈉染色為陰性,未見著染,角膜恢復(fù)透明。3.自動驗光儀測量結(jié)果:HIFU輻照兔眼角膜術(shù)后1、7、14天角膜平均曲率較術(shù)前稍有增加,其中7天時增加最為顯著。術(shù)后30、60、90天角膜曲率較術(shù)前有所降低,其中術(shù)后90天角膜曲率稍有增高但曲率值未大于術(shù)前角膜曲率。4.光鏡下視網(wǎng)膜HE染色結(jié)果:對照組視網(wǎng)膜各層排列規(guī)律整齊,無散亂排列,視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層核清楚分明,視網(wǎng)膜各層間界線清晰厚度正常,間隔較密。輻照后各個時間節(jié)點(diǎn)切片HE染色光鏡下觀察結(jié)果較輻照前無明顯變化。5.光鏡下視神經(jīng)HE染色結(jié)果:對照組視神經(jīng)橫切面神經(jīng)纖維排列均勻規(guī)整,基質(zhì)淡紅染,無炎性細(xì)胞浸潤,間隔均勻,血管形態(tài)完好。術(shù)后各時間點(diǎn)視神經(jīng)組織切片HE染色光鏡下結(jié)果較術(shù)前無明顯改變。6.電鏡下視神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果:對照組視神經(jīng)纖維髓鞘完整、光滑致密,排列規(guī)整,無脫髓鞘改變。術(shù)后各時間點(diǎn)視神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)較術(shù)前未見明顯變化。7.視網(wǎng)膜免疫組化結(jié)果:正常視網(wǎng)膜中可見神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)、外顆粒層有少量的Nogo-A陽性表達(dá)。術(shù)后各個時間點(diǎn)實(shí)驗組在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層和外核層均有Nogo-A表達(dá),與正常對照組比較表達(dá)未見明顯增強(qiáng)。8.視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果:對照組及各實(shí)驗組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(RGCS)未見陽性凋亡細(xì)胞,無細(xì)胞核皺縮或核碎裂、染色質(zhì)凝集等征象。9.視網(wǎng)膜組織中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量測定結(jié)果:術(shù)后1天及7天實(shí)驗組與對照組比較,實(shí)驗組SOD活力均低于對照組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。不同時間點(diǎn),實(shí)驗組組間相比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。經(jīng)統(tǒng)計分析,實(shí)驗組MDA含量均高于并接近于對照組MDA含量,同一時間點(diǎn)實(shí)驗組與對照組相比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗組在各個時間點(diǎn)的比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。10.視網(wǎng)膜光學(xué)相干斷層掃描結(jié)果:OCT組實(shí)驗兔結(jié)果顯示不同時間點(diǎn)實(shí)驗組與正常對照組的視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)均正常,視網(wǎng)膜內(nèi)層結(jié)構(gòu)清晰可見,各層結(jié)構(gòu)界線分明、顯像清晰。術(shù)前視網(wǎng)膜厚度均高于術(shù)后各時點(diǎn)視網(wǎng)膜厚度,但經(jīng)統(tǒng)計分析后同一時間點(diǎn)實(shí)驗組與對照組間的數(shù)據(jù)比較差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)且不同時間點(diǎn)組間的數(shù)據(jù)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.適當(dāng)劑量的HIFU可準(zhǔn)確定位于角膜基質(zhì)層,對輻照區(qū)外正常角膜組織無明顯損傷;HIFU可利用其熱機(jī)制作用于角膜使角膜基質(zhì)膠原纖維收縮,角膜曲率增加,表明將HIFU應(yīng)用于角膜改變其屈光狀態(tài)的模式具有安全可行的特點(diǎn)。2.HIFU輻照活兔眼角膜后對視網(wǎng)膜及視神經(jīng)組織學(xué)形態(tài)及各生物活性因子無顯著影響,因此HIFU在輻照眼角膜治療角膜疾病及改變屈光狀態(tài)的同時對視網(wǎng)膜及視神經(jīng)是安全可靠的。提示HIFU在眼科屈光領(lǐng)域具有巨大應(yīng)用前景。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R77

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2270486