【摘要】：目的:五沒(méi)食子�；咸烟�(1,2,3,4,6-Pentagalloylglucose,PGG)是一種天然多酚類(lèi)化合物,它廣泛存在于中草藥植物中,五倍子、牡丹皮和白芍等植物含量較高。研究表明,PGG具有抗炎、抗腫瘤及抗糖尿病等作用。后發(fā)性白內(nèi)障是白內(nèi)障囊外摘除術(shù)后最常見(jiàn)的并發(fā)癥,目前認(rèn)為術(shù)中殘留的晶狀體上皮細(xì)胞的增殖是引起后發(fā)性白內(nèi)障的主要原因。本研究擬探討PGG對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞增殖的抑制作用及其作用機(jī)制。方法:(1)PGG的濃度設(shè)為0、25、50、75μmol/L,作用SRA細(xì)胞的時(shí)間為24、48、72 h,采用MTT法檢測(cè)PGG對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞增殖的影響,顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。(2)PGG作用SRA細(xì)胞48 h后,采用Annexin VFITC/PI雙染,流式細(xì)胞技術(shù)分析PGG對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞凋亡率的影響。(3)PGG作用SRA細(xì)胞48 h后,采用PI單染,流式細(xì)胞技術(shù)分析PGG對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞周期的影響。(4)PGG作用SRA細(xì)胞48 h后,采用Western blotting檢測(cè)PGG對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞NF-κB p65、phosphoNF-κB p65、phospho-stat3和cyclin D1蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:(1)PGG孵育后,貼壁的SRA細(xì)胞數(shù)量明顯減少,細(xì)胞變圓、變小,細(xì)胞增殖受到明顯的抑制,且具有時(shí)間和劑量依賴(lài)性。在同一時(shí)間段,藥物濃度越大,PGG對(duì)SRA細(xì)胞增殖的抑制率越大,其中72 h最明顯。72 h時(shí),藥物濃度為25μmol/L時(shí),抑制率為(30.75±2.63)%,藥物濃度為50μmol/L時(shí),抑制率為(39.69±0.67)%,藥物濃度為75μmol/L時(shí),抑制率達(dá)到(47.84±0.98)%,以對(duì)照組(藥物濃度為0)增殖抑制率為0做參照,不同藥物濃度組抑制率明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1842.49,P0.01)。同一藥物濃度時(shí),PGG作用時(shí)間越長(zhǎng),SRA細(xì)胞的增殖抑制率越大。藥物濃度為75μmol/L作用24 h時(shí),SRA細(xì)胞的增殖抑制率為(11.14±1.29)%,作用48 h時(shí),抑制率為(30.42±2.42)%,72 h時(shí),抑制率高達(dá)(47.84±0.98)%,抑制率明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=716.26,P0.01)。(2)與對(duì)照組比較,PGG處理的SRA細(xì)胞早期凋亡率和晚期凋亡率均增加,隨PGG濃度的增加細(xì)胞凋亡率明顯增加,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(3)與對(duì)照組比較,隨著PGG藥物濃度的增加,S期細(xì)胞所占百分率增加,藥物濃度為75μmol/L時(shí),S期細(xì)胞百分率為(44.28±1.33)%,藥物濃度為50μmol/L時(shí),S期細(xì)胞百分率為(37.67±1.29)%,與對(duì)照組(28.58±1.27)%比較,S期細(xì)胞所占百分率明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=77.11,P0.01)。(4)PGG濃度增加,PGG孵育的SRA細(xì)胞的NF-κB p65的表達(dá)無(wú)明顯改變,但phospho-NF-κB p65表達(dá)上調(diào),phospho-stat3與cyclin D1表達(dá)下調(diào)。結(jié)論:PGG可抑制晶狀體上皮細(xì)胞的增殖,促進(jìn)晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡,阻滯晶狀體上皮細(xì)胞于S期。PGG的這些作用可能與其上調(diào)蛋白phospho-NF-κB p65,降低phospho-Stat3、cyclin D1的表達(dá)有關(guān)。因此,PGG有望成為防治后發(fā)性白內(nèi)障的有效藥物。
[Abstract]:Objective: PGG is a kind of natural polyphenols. It is widely used in Chinese herbal medicine plants such as Galla chinensis peony and Paeonia lanceolata. The results showed that PGG had anti-inflammatory, anti-tumor and anti-diabetes effects. Posterior cataract is the most common complication after extracapsular cataract extraction. The aim of this study was to investigate the inhibitory effect of PGG on the proliferation of human lens epithelial cells and its mechanism. Methods: (1) the effect of PGG on the proliferation of human lens epithelial cells was detected by MTT assay, and the morphological changes of SRA cells were observed by microscope. (2) SRA cells treated with PGG for 48 h were treated with Annexin VFITC/PI double staining. Flow cytometry was used to analyze the effect of PGG on apoptosis rate of human lens epithelial cells. (3) SRA cells were treated with PGG for 48 h, then PI staining was used. Flow cytometry was used to analyze the effect of PGG on the cell cycle of human lens epithelial cells. (4) SRA cells were treated with PGG for 48 h. The effects of PGG on the expression of phosphoNF- 魏 B p65 phospho-stat3 and cyclin D1 protein in human lens epithelial cells were detected by Western blotting. Results: (1) after PGG incubation, the number of adherent SRA cells decreased significantly, the cells became round and smaller, and the proliferation of SRA cells was significantly inhibited in a time-and dose-dependent manner. At the same time, the inhibition rate of SRA cell proliferation was increased with the increase of drug concentration. The inhibition rate was (30.75 鹵2.63) at 72 h, (30.75 鹵2.63) at 25 渭 mol/L, (39.69 鹵0.67) at 50 渭 mol/L and (39.69 鹵0.67) at 75 渭 mol/L. The inhibition rate was (47.84 鹵0.98) and the control group (drug concentration was 0). The inhibition rate of different drug concentration groups was significantly increased (FF1842.49, P0.01). At the same drug concentration, the proliferation inhibition rate of SRA cells increased with the time of treatment with PGG. The inhibitory rate of proliferation was (11.14 鹵1.29) at the concentration of 75 渭 mol/L for 24 h, and the inhibitory rate was (30.42 鹵2.42) and (47.84 鹵0.98) at 48 h. Compared with the control group, the early and late apoptosis rates of SRA cells treated with SRA increased significantly with the increase of PGG concentration, and the difference was statistically significant (P0.01). (3) compared with the control group (P0.01). (3), the difference was statistically significant (FF716.26 P0.01). (2), and the apoptosis rate of SRA cells increased significantly with the increase of PGG concentration (P0.01). (3). With the increase of PGG concentration, the percentage of S phase cells was (44.28 鹵1.33) at 75 渭 mol/L and (37.67 鹵1.29) at 50 渭 mol/L. Compared with the control group (28.58 鹵1.27), the percentage of S phase cells increased significantly. There was no significant difference in the expression of NF- 魏 B p65 in SRA cells incubated with SRA, but the expression of phospho-NF- 魏 B p65 up-regulated phospho-stat3 and down-regulated the expression of cyclin D1. Conclusion WPGG can inhibit the proliferation of lens epithelial cells and promote the apoptosis of lens epithelial cells. These effects may be related to the up-regulation of phospho-NF- 魏 B p65 and the decrease of phospho-Stat3,cyclin D1 expression. Therefore, PGG is expected to be an effective drug for the prevention and treatment of post-cataract.
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R776.1

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本文編號(hào)：2248910