【摘要】：目的:采用RNA干擾技術(shù)抑制胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(insulin-like growth factor-binding protein related protein 1,IGFBP-rP1)基因表達(dá)后,觀察鼻咽癌細(xì)胞系CNE1和CNE-2Z生物學(xué)行為的變化,并探討其可能的分子機(jī)制。方法:通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)25例鼻咽癌組織和22例慢性鼻咽炎組織中IGFBP-rP1蛋白的表達(dá)情況。將針對(duì)IGFBP-rP1基因的特異性siRNA(同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照)轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞系CNE1和CNE-2Z,然后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法鑒定IGFBP-rP1基因的沉默效果,并采用蛋白印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞中總的細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶(extracellular regulated kinase,ERK)1/2和磷酸化ERK(phosphorylated ERK,p-ERK)的表達(dá)。采用細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)和CCK-8法分別檢測(cè)干擾IGFBP-rP1基因表達(dá)對(duì)鼻咽癌CNE1和CNE-2Z細(xì)胞遷移、侵襲和增殖能力的影響。結(jié)果:鼻咽癌組織中IGFBP-rP1蛋白的表達(dá)明顯高于慢性鼻咽炎組織(P0.05)。特異性siRNA轉(zhuǎn)染后,鼻咽癌CNE1和CNE-2Z細(xì)胞中IGFBP-rP1基因的表達(dá)被明顯抑制(P值均0.05),細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力均明顯降低(P值均0.05);同時(shí)兩種細(xì)胞中p-ERK表達(dá)水平明顯下調(diào)(P值均0.05),而總ERK1/2的表達(dá)水平不變(P值均0.05)。結(jié)論:下調(diào)IGFBP-rP1基因表達(dá)可能通過(guò)調(diào)控ERK通路,抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲。提示IGFBP-rP1有望成為鼻咽癌基因治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。
[Abstract]:Aim: to investigate the biological behavior of nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell line CNE1 and CNE-2Z after inhibiting the expression of insulin-like growth factor-binding protein-associated protein 1 (insulin-like growth factor-binding protein related protein _ 1IGFBP-rP1) by RNA interference technique, and to explore its possible molecular mechanism. Methods: immunohistochemical method was used to detect the expression of IGFBP-rP1 protein in 25 cases of nasopharyngeal carcinoma and 22 cases of chronic nasopharyngitis. The specific siRNA targeting IGFBP-rP1 gene (with negative control) was transfected into nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell lines CNE1 and CNE-2Z,. The silencing effect of IGFBP-rP1 gene was evaluated by real-time fluorescent quantitative PCR and Western blotting. The expression of total extracellular regulated kinase (extracellular regulated kinase,ERK) 1 / 2 and phosphorylated ERK (phosphorylated ERK,p-ERK were detected by Western blot. The effects of interfering IGFBP-rP1 gene expression on the migration, invasion and proliferation of nasopharyngeal carcinoma (NPC) CNE1 and CNE-2Z cells were detected by transwell invasion assay and CCK-8 assay respectively. Results: the expression of IGFBP-rP1 protein in nasopharyngeal carcinoma was significantly higher than that in chronic nasopharyngitis (P0.05). After transfection of specific siRNA, the expression of IGFBP-rP1 gene was significantly inhibited in CNE1 and CNE-2Z cells of nasopharyngeal carcinoma (P < 0. 05). At the same time, the expression of p-ERK was significantly decreased (P < 0. 05), while the expression of total ERK1/2 was not changed (P = 0. 05). Conclusion: down-regulation of IGFBP-rP1 gene expression may inhibit the proliferation, migration and invasion of nasopharyngeal carcinoma cells by regulating ERK pathway. The results suggest that IGFBP-rP1 may be a new target for gene therapy of nasopharyngeal carcinoma.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63

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4 黃s

本文編號(hào)：2211783