【摘要】：目的探討MicroRNA-21(miR-21)及其靶基因第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因(PTEN)和程序性細胞死亡因子4(PDCD4)蛋白在兒童中耳膽脂瘤細胞增殖和凋亡中的調(diào)控作用。方法選取2013年8月至2015年3月兒童中耳膽脂瘤患者手術(shù)標本23例,提取并培養(yǎng)其中耳膽脂瘤角質(zhì)細胞,分為實驗組、陰性對照組和空白對照組,實驗組以介導miR-21抑制體的慢病毒載體轉(zhuǎn)染中耳膽脂瘤角質(zhì)細胞,陰性對照組轉(zhuǎn)染空慢病毒載體,空白對照組不進行處理,利用實時定量PCR(qRT-PCR)和Western blot檢測各組細胞中miR-21和PTEN基因、PDCD4蛋白的表達,利用EdU和TUNEL法檢測各組細胞的增殖和凋亡情況。結(jié)果實驗組膽脂瘤角質(zhì)細胞中miR-21表達顯著低于空白對照組和陰性對照組(P0.05),PTEN基因和PDCD4蛋白的表達明顯高于空白對照組和陰性對照組(P0.05),EdU陽性細胞顯著低于陰性對照組和空白對照組(P0.05),TUNEL陽性細胞顯著高于陰性對照組和空白對照組(P0.05)。結(jié)論 MiR-21可負性調(diào)控其靶基因PTEN和PDCD4的表達,miR-21抑制體可有效抑制兒童膽脂瘤角質(zhì)細胞的增殖活性,促進細胞的凋亡。
[Abstract]:Objective to investigate the role of MicroRNA-21 (miR-21) and its target gene chromosome 10 deletion of phosphatase and tensin homologous gene (PTEN) and programmed cell death factor 4 (PDCD4) in the proliferation and apoptosis of middle ear cholesteatoma cells in children. Methods from August 2013 to March 2015, 23 children with middle ear cholesteatoma were collected and cultured. The keratinocytes were divided into three groups: experimental group, negative control group and blank control group. In experimental group, lentivirus vector mediated miR-21 inhibitor was transfected into keratinocytes of middle ear cholesteatoma, negative control group was transfected with empty lentivirus vector, blank control group was not treated. Real-time quantitative PCR (qRT-PCR) and Western blot were used to detect the expression of miR-21 and PTEN gene pPDCD4, and EdU and TUNEL methods were used to detect the proliferation and apoptosis of the cells. Results the expression of miR-21 in the keratinocytes of cholesteatoma in the experimental group was significantly lower than that in the blank control group and the negative control group (P0.05). The expression of PTEN gene and PDCD4 protein in the cholesteatoma keratinocytes in the experimental group was significantly higher than that in the blank control group and the negative control group (P0.05). The Tunel positive cells in the control group (P0.05) were significantly higher than those in the negative control group and the blank control group (P0.05). Conclusion MiR-21 can negatively regulate the expression of PTEN and PDCD4 in children cholesteatoma keratinocytes and can effectively inhibit the proliferation of keratinocytes and promote the apoptosis of children cholesteatoma keratinocytes.
【作者單位】： 鄭州大學第一附屬醫(yī)院耳科;
【基金】：河南省教育廳科技攻關(guān)項目(13A320649)
【分類號】：R764.21

【參考文獻】

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本文編號：2142967