本文選題：鼻黏膜 + RNA干擾　； 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的 研究采用短發(fā)夾RNA(shRNA)特異性沉默人鼻黏膜上皮細(xì)胞(human nasal epithelial cells, HNEC)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1α HIF-1α),觀察其對HNEC表達(dá)血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor, TGF)β1、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor, bFGF/fibroblast growth factor-2,FGF-2)三種生長因子的影響。方法取因鼾癥行下鼻甲切除術(shù)患者的下鼻甲黏膜,體外培養(yǎng)原代細(xì)胞,體外設(shè)計合成以腺病毒為載體GFP標(biāo)記的shRNA(包括ad-HIF shRNA及ad-HIF shRNA-neg).將細(xì)胞分為空白對照組、無義寡核苷酸陰性對照組(ad-HIF shRNA-neg)、ad-HIF shRNA干擾組、低氧培養(yǎng)組。蛋白質(zhì)免疫印跡試驗Western blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染病毒后HNEC中HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的蛋白的表達(dá)情況；RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果轉(zhuǎn)染ad-HIF shRNA-neg前后,HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的蛋白差異(q1=1.3167; q2=0.7513; q3=0.3251; q4=0.6592)及其mRNA差異(q1=2.3514; q2=37.0480; q3=17.1131; q4=1.0917)均無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。與陰性對照組及空白對照組相比,轉(zhuǎn)染ad-HIF shRNA后,]BF-1α表達(dá)蛋白下降40%(q=31.4690),mRNA表達(dá)下降39%(q=16.5900),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)；同時VEGF. TGF-β1、bFGF的蛋白及mRNA表達(dá)也隨之下降,蛋白差異(q1=19.1571；q2=33.8090；q3=45.8940)及mRNA差異(q1=22.3920；q2=17.8800;q3=11.5991)均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)；與陰性對照組及空白對照組相比,低氧培養(yǎng)HNEC,其HIF-1α表達(dá)蛋白升高50%(q=32.3540),mRNA表達(dá)升高46%(q=15.4570)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)；同時VEGF.TGF-β1、bFGF的蛋白及mRNA表達(dá)也隨之升高,蛋白差異(q1=20.2410;q2=35.2010;q3=47.3150)及mRNA差異(q1=21.4713；q2=18.3710；q3=10.3651)均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論：特異性阻斷HNEC的HIF-1α表達(dá)能夠有效地抑制其VEGF, TGF-β1和bFGF的表達(dá);低氧培養(yǎng)使HNEC中HIF-1α表達(dá)升高VEGR TGF-β1和bFGF的表達(dá)隨之升高。表明HNEC中HIF-1α可能通過直接或間接途徑調(diào)控著VEGF、 bFGF和TGF-β1的表達(dá)。
[Abstract]:Objective to study the expression of vascular endothelial growth factor (vascular endothelial growth factor,), transforming growth factor (transforming growth factor,) 尾 1 and alkaloids in human nasal epithelial cells (human nasal epithelial cells, HNECs) specifically silenced by short hairpin RNA (shRNA), and the expression of hypoxia inducible factor-1 偽 (hypoxia inducible factor-1 偽 HIF-1 偽 HIF-1 偽 in HNECs was observed. Effects of (basic fibroblast growth factor, bFGF / fibroblast growth factor-2 FGF-2). Methods the mucous membrane of inferior turbinate of patients with snoring underwent inferior turbinate resection was used to culture primary cells in vitro. In vitro, shRNA labeled by adenovirus was designed and synthesized (including ad-HIF shRNA and ad-HIF shRNA-neg). The cells were divided into blank control group, ad-HIF shRNA-neg negative control group and hypoxia culture group. Western blot assay was used to detect the expression of HIF-1 偽 -VEGF- 尾 _ 1bFGF protein in HNEC. The expression of HIF-1 偽 VEGF- 尾 _ 1bFGF mRNA was detected by reverse transcription chain reaction (HIF-1 偽 VEGF- 尾 _ 1bFGF). Results before and after transfection of ad-HIF shRNA-neg, there was no significant difference in hIF-1 偽 -VEGF- 尾 1bFGF protein (q1p1.3167; Q2O0.7513; q3O0.3251; q4n0.6592) and its mRNA difference (q12.3514; q237.0480; q3m1131; q4n1.0917) (p0.05). Compared with the negative control group and the blank control group, the expression of] BF-1 偽 mRNA decreased by 40% (ql31. 4690) after transfection of ad-HIF shRNA by 39% (qf16. 5900), the difference was statistically significant (p0.05), and the expression of VEGF- 偽 decreased by 39% (p0.05). The protein and mRNA expression of TGF- 尾 _ 1bFGF also decreased, and the protein difference (q1 ~ (19.1571) ~ (33. 8090) and mRNA (Q _ (1) 22. 3920 ~ (17. 8800) Q _ (3) and (11. 5991) were significant (p0.05), compared with negative control group and blank control group, the difference of TGF- 尾 _ 1bFGF protein and mRNA was significant (p0.05), compared with negative control group and blank control group, the expression of TGF- 尾 _ 1bFGF was significantly lower than that of negative control group and blank control group. In hypoxic HNECs, the expression of HIF-1 偽 protein increased by 50% (qf32.3540) and increased by 46% (ql15.4570), and the protein and mRNA expression of VEGF.TGF- 尾 _ 1nbFGF was also increased (p0.05), the difference of protein (q120.2410q235.2010Q3N3FN 47.3150) and mRNA (q121.4713Q2O18.3710q310q310.3651) was significant (p0.05). Conclusion: specifically blocking the expression of HIF-1 偽 in HNEC can effectively inhibit the expression of VEGF-, TGF- 尾 1 and bFGF in HNEC, and hypoxia culture can increase the expression of HIF-1 偽 and bFGF in HNEC with the increase of VEGR TGF- 尾 1 and bFGF. It is suggested that HIF-1 偽 may regulate the expression of VEGF, bFGF and TGF- 尾 1 directly or indirectly in HNEC.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R765.21

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本文編號：2109504