發(fā)布時間：2018-06-11 15:51

  本文選題：剝奪性弱視 + 貓　； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：弱視的發(fā)生對兒童視力影響很大，若不采取及時的治療將會導(dǎo)致終身視力缺陷。目前國內(nèi)外臨床上多采用左旋多巴（L-dopa）治療弱視，文獻(xiàn)報道其已取得了一定的成功。然而，左旋多巴治療存在外周副作用較大、耐受性差、藥效波動等缺點。鑒于早期實驗，本課題組已經(jīng)合成新型的左旋多巴衍生物左旋多巴甲酯（LDME）。本研究的目的是觀察不同劑量的LDME對剝奪性弱視貓模型的影響，評價其治療弱視的主要藥效學(xué)作用，并探討LDME的可能作用機制。 方法：初生家養(yǎng)幼貓（2-4wk）30只隨機分為6組（每組5只）：左旋多巴甲酯高劑量組（LDME_H）、中劑量組（LDME_M）、低劑量組（LDMEL）、陽性藥L-dopa對照組、正常對照組（NC）、弱視模型對照組（AM）。除了正常組外，于4 wk時參照Hubel經(jīng)典實驗方法對各組幼貓進(jìn)行麻醉后的左眼單純上下瞼縫合建立剝奪性弱視。12周后經(jīng)圖形視覺誘發(fā)電位（P-VEP）確定形成弱視后,灌胃給與左旋多巴甲酯20, 40, 80 mg·kg~(-1)，陽性對照組給與左旋多巴40 mg·kg~(-1)，正常對照組及模型組均給與等量生理鹽水。每天一次持續(xù)30天。 ①應(yīng)用圖形視覺誘發(fā)電位（P-VEP）研究左旋多巴甲酯對各組貓視皮質(zhì)電生理的影響；②進(jìn)行HE染色、Nissl染色和透射電鏡觀察左旋多巴甲酯給藥組貓視皮質(zhì)17區(qū)形態(tài)學(xué)的變化；③TUNEL檢測法觀察視皮質(zhì)17區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡情況；④免疫組織化學(xué)法檢測視皮質(zhì)17區(qū)中神經(jīng)生長因子（NGF）、c-Fos的表達(dá)；⑤Western-blot法檢測視皮質(zhì)17區(qū)中NGF、c-Fos蛋白的表達(dá)。⑥熒光定量PCR (FQ-PCR)法檢測視皮質(zhì)17區(qū)中c-fos mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1、視覺電生理研究 P-VEP結(jié)果顯示，弱視模型組（AC）中剝奪眼表現(xiàn)為波幅值明顯降低及P100值潛時延長的特征，與同側(cè)正常對照眼比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。與弱視模型組比較，藥物治療各組弱視眼P100值潛時逐漸縮短，，其中LDMEH最為明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p0.05 and p0.01）；同時藥物治療各組弱視眼振幅有不同程度的升高，有顯著性差異（p0.05 andp0.01）。提示LDME能有效地改善剝奪性弱視貓弱視眼的信號傳導(dǎo)功能。 2、視皮質(zhì)17區(qū)的形態(tài)學(xué)研究 弱視模型組（AC）視皮層17區(qū)的神經(jīng)元形態(tài)表現(xiàn)為解剖和生理上的損傷。而經(jīng)L-dopa和LDME治療后，各組視皮層17區(qū)的神經(jīng)元逐漸修復(fù)和再生，表現(xiàn)為Nissl小體和神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量的增加。 3、LDME對弱視貓模型視皮質(zhì)17區(qū)細(xì)胞凋亡表達(dá)的影響 弱視模型組中，神經(jīng)元細(xì)胞發(fā)生了嚴(yán)重的DNA鏈斷裂情況，表現(xiàn)為TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)量較多。與模型對照組比較，給藥各組的視皮層17區(qū)神經(jīng)元凋亡細(xì)胞計數(shù)均有不同程度的減少。其中LDMEH表現(xiàn)出明顯的抗凋亡的作用，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。給藥各組都對弱視眼視皮質(zhì)17區(qū)神經(jīng)細(xì)胞有著一定程度的逆轉(zhuǎn)細(xì)胞凋亡作用，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05and P0.01）。 4、LDME對弱視貓模型視皮質(zhì)17區(qū)神經(jīng)生長因子（NGF）表達(dá)的影響 與弱視模型組比較，治療各組（包括陽性對照組、左旋多巴甲酯高、中、低劑量組）NGF免疫陽性細(xì)胞數(shù)量在各層有所增加，層間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01 and P0.05）。與L-dopa對照組比較，同劑量給藥的LDMEM中NGF陽性細(xì)胞數(shù)多于L-dopa陽性組，提示LDME發(fā)揮了較好的治療作用，但LDMEM低于LDMEH和正常對照組，差異均未見統(tǒng)計學(xué)意義。Western blot分析顯示，弱視模型組NGF蛋白的表達(dá)明顯少于其他各組（P0.01）。而各治療組中的NGF蛋白的表達(dá)逐漸增加。 5、LDME對弱視貓模型視皮質(zhì)17區(qū)c-fos mRNA表達(dá)的影響 FQ-PCR表明，正常組貓視皮層c-fos mRNA表達(dá)水平活躍。與正常對照組相比較，弱視模型組弱視貓視皮層c-fos mRNA表達(dá)水平明顯下調(diào)，差異有顯著性（P0.01）。與弱視模型組相比，治療各組（包括L-dopa和LDME）c-fos mRNA表達(dá)水平逐漸上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01），而其中LDMEH表達(dá)最為明顯（P0.01）。 6、LDME對弱視貓模型視皮質(zhì)17區(qū)c-Fos蛋白表達(dá)的影響 弱視對照組視皮層17區(qū)中c-Fos陽性細(xì)胞較少表達(dá)，與正常組比較其密度明顯降低，差別有統(tǒng)計意義（P0.01或P0.05）。其中LDMEH陽性細(xì)胞密度高于弱視對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。但與正常對照組比較，LDMEH的c-Fos免疫陽性細(xì)胞密度在各層均少于正常組對照組，兩者間未見有統(tǒng)計學(xué)差異。Western blot分析顯示，弱視模型組c-Fos蛋白的表達(dá)明顯少于其他各組（P0.01）。而各治療組中c-Fos蛋白的表達(dá)逐漸增加。結(jié)論： ①左旋多巴甲酯明顯縮短剝奪性弱視貓P100波峰潛時和提升P100波幅值，故其具有改善剝奪性弱視貓的信號傳導(dǎo)而恢復(fù)視覺功能的作用。 ②左旋多巴甲酯治療具有恢復(fù)形覺剝奪弱視視皮質(zhì)神經(jīng)元修復(fù)、再生能力，促進(jìn)髓鞘結(jié)構(gòu)髓磷脂的合成進(jìn)而增強神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)并更好地保護(hù)髓鞘。 ③左旋多巴甲酯對弱視視皮層17區(qū)的神經(jīng)細(xì)胞有效地進(jìn)行抑制凋亡進(jìn)程。 ④左旋多巴甲酯治療對于形覺剝奪性弱視貓視皮質(zhì)17區(qū)神經(jīng)細(xì)胞NGF表達(dá)的上調(diào)與神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量的增加（尼氏小體數(shù)量的增加）、P-VEP中各波值的改善效果相一致。 ⑤左旋多巴甲酯有效促進(jìn)剝奪性弱視貓視皮質(zhì)17區(qū)c-fos mRNA水平的上調(diào)。 ⑥左旋多巴甲酯有效增加剝奪性弱視貓視皮質(zhì)17區(qū)c-Fos蛋白的表達(dá)。 ⑦左旋多巴甲酯有效恢復(fù)視皮質(zhì)17區(qū)的功能并可作為弱視治療的潛在藥物。左旋多巴甲酯治療弱視的機制可能與其調(diào)控視皮質(zhì)17區(qū)NGF、c-fos的表達(dá)而抑制細(xì)胞凋亡進(jìn)程以及促進(jìn)神經(jīng)元修復(fù)、再生有關(guān)。
[Abstract]:Objective : To study the effect of LDME on the model of deprivation amblyopia cats , and to evaluate the possible mechanism of LDME in the treatment of amblyopia .
Methods : 30 rats were randomly divided into 6 groups ( 5 rats in each group ) : high dose group ( LDME _ H ) , medium dose group ( LDME _ M ) , low - dose group ( LDMEL ) , L - dopa control group , normal control group ( NC ) and amblyopia model control group ( AM ) .
( 1 ) Using the visual evoked potential ( P - VEP ) , the effects of methyl levo - dopa methyl ester on the electrophysiology of visual cortex in all groups of cats were studied .
( 2 ) HE staining , Nissl staining and transmission electron microscope were used to observe the morphological changes of 17 area of cat visual cortex in the administration group .
( 3 ) TUNEL assay was used to observe the apoptosis of neurons in the visual cortex .
( 4 ) The expression of nerve growth factor ( NGF ) , c - fos in the optic cortex 17 region was detected by immunohistochemical method .
( 5 ) Western - blot was used to detect the expression of NGF and c - fos protein in 17 regions of optic cortex .
Results :
1 . Visual electrophysiology study
The results of P - VEP showed that in the amblyopia model group ( AC ) , the deprivation - eye performance was obviously reduced and the P100 value was prolonged . Compared with the normal control eye , the difference was statistically significant ( P0.01 ) . Compared with the amblyopia model group , the P100 value of the amblyopia in the group of amblyopia was shortened gradually , among which the LDMEH was the most obvious and the difference was statistically significant ( p < 0.05 and p0.01 ) ;
At the same time , there was a significant difference in the amplitude of amblyopia ( p . 05 andp . 01 ) . It is suggested that LDME can effectively improve the signal conduction function of the amblyopia eye of the deprivation amblyopia cat .
2 . Morphological study of visual cortex 17
The neuronal morphology of the visual cortex 17 area of the amblyopia model group ( AC ) showed anatomical and physiological damage . After treated with L - dopa and LDME , the neurons in each group of visual cortex 17 were gradually repaired and regenerated , showing the increase of Nissl cells and the number of nerve cells .
Effect of 3 銆

本文編號：2005838