本文選題：喉癌 + 天冬酰胺酶��； 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:頭頸部腫瘤是常見威脅人類健康的惡性腫瘤,而喉癌是最主要的頭頸部惡性腫瘤之一,并且喉癌的發(fā)病率仍在逐年增加。盡管對喉癌的治療方法不斷改善,其五年生存率未明顯提高。因此,尋找治療喉癌的新療法迫在眉睫。耗竭腫瘤生長所必需的氨基酸,達(dá)到“餓死”腫瘤細(xì)胞效果的氨基酸耗竭酶成為抗腫瘤研究的熱點。對于大多數(shù)腫瘤細(xì)胞自身不能合成天冬酰胺,必須依賴外源的天冬酰胺才能生存。天冬酰胺酶(asparaginase)可通過降解天冬酰胺,從而抑制腫瘤細(xì)胞中蛋白質(zhì)的合成,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的死亡。目前天冬酰胺酶臨床已被用于白血病、淋巴瘤和黑色素瘤的治療。然而,針對于喉癌的治療卻尚未報道。細(xì)胞自噬是通過依賴于溶酶體降解蛋白質(zhì)和細(xì)胞器,對降解產(chǎn)物循環(huán)利用的過程。正常情況下,自噬保持低水平狀態(tài)。在內(nèi)外界壓力下自噬可快速上調(diào),以維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)。近年來的研究表明,自噬在腫瘤治療方面起“雙刃劍”作用,治療腫瘤時細(xì)胞自噬既能提高腫瘤細(xì)胞的生存能力,也能加速細(xì)胞死亡。對于天冬酰胺酶耗竭天冬酰胺是否在喉癌細(xì)胞中誘導(dǎo)自噬,及自噬在其起的作用未有報道。方法:1、MTT法檢測天冬酰胺酶對喉癌細(xì)胞Tu212和Tu686的細(xì)胞毒性,以及聯(lián)合自噬抑制劑氯喹(CQ)對細(xì)胞的毒性影響;檢測抗氧化劑N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)在天冬酰胺酶對喉癌細(xì)胞生長作用的影響;2、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡。天冬酰胺酶單獨、聯(lián)合自噬抑制劑CQ對Tu212和Tu686細(xì)胞凋亡的影響;抗氧化劑NAC對天冬酰胺酶誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞凋亡的影響;3、透射電子顯微鏡(TEM)觀察天冬酰胺酶誘導(dǎo)Tu212和Tu686細(xì)胞中自噬體的產(chǎn)生;4、Western blot法檢測在Tu212和Tu686細(xì)胞中天冬酰胺合成酶(ASNS)的表達(dá)情況;檢測天冬酰胺酶單獨作用、聯(lián)合CQ作用時,喉癌細(xì)胞中自噬特異蛋白LC3-II的表達(dá)情況;檢測凋亡相關(guān)蛋白Caspase 3、PARP表達(dá)量的變化;5、激光共聚焦顯微鏡(Confocal microscopy)檢測自噬及自噬流的產(chǎn)生情況。結(jié)果:喉癌細(xì)胞Tu212和Tu686中天冬酰胺合成酶表達(dá)缺失;天冬酰胺酶通過耗竭天冬酰胺對喉癌細(xì)胞Tu212和Tu686細(xì)胞顯著殺傷。天冬酰胺酶能誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞產(chǎn)生顯著細(xì)胞凋亡,并且誘導(dǎo)凋亡相關(guān)蛋白Caspase 3、PARP剪切,Caspase抑制劑z-VAD-fmk明顯減弱天冬酰胺酶誘導(dǎo)的Tu212和Tu686細(xì)胞凋亡,因此表明天冬酰胺酶誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是依賴Caspase途徑。天冬酰胺酶能誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞中自噬體的出現(xiàn),誘導(dǎo)LC-II表達(dá),以及自噬流的產(chǎn)生。天冬酰胺酶引起的自噬伴隨信號通路Akt/mTOR的抑制和信號通路Erk1/2的激活,表明Akt/mTOR信號通路和Erk1/2信號通路參與了天冬酰胺酶誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞自噬中的分子調(diào)控機(jī)制。值得注意的是,聯(lián)合自噬抑制劑CQ作用于喉癌細(xì)胞時,顯著增強(qiáng)天冬酰胺酶對喉癌細(xì)胞Tu212和Tu686的生長抑制以及細(xì)胞凋亡。這表明,當(dāng)天冬酰胺酶作用于喉癌細(xì)胞時,細(xì)胞自噬在此過程中起保護(hù)性作用。抗氧劑NAC可以明顯抑制天冬酰胺誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬,并且天冬酰胺引起的細(xì)胞毒性也顯著性減弱,表明ROS在天冬酰胺酶誘導(dǎo)的自噬及細(xì)胞毒性中發(fā)揮重要作用。綜上所述:天冬酰胺酶對喉癌細(xì)胞Tu212和Tu686有顯著的細(xì)胞毒性。天冬酰胺酶能誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞發(fā)生自噬。抑制細(xì)胞自噬明顯增強(qiáng)天冬酰胺酶對喉癌細(xì)胞殺傷作用。因此,為喉癌治療提供新的思路。
[Abstract]:Objective: head and neck tumors are one of the most common malignant tumors that threaten human health, and laryngeal cancer is one of the most important head and neck cancers, and the incidence of larynx cancer is still increasing year by year. Although the treatment methods for larynx cancer are constantly improving, the five-year survival rate is not obviously improved. Therefore, the new therapy for the treatment of larynx cancer is imminent. The amino acid depleting enzymes necessary for the growth of the cancer cells are the hot spots in cancer research. For the inability of most tumor cells to synthesize asparagine itself, it is necessary to rely on exogenous asparagine to survive. Asparaginase can inhibit the tumor by degrading asparagine. The synthesis of proteins in the cell and the death of tumor cells. Currently, asparaginase has been used in the treatment of leukemia, lymphoma and melanoma. However, treatment for laryngoma has not been reported. Autophagy is a process of recycling the degradation products by relying on lysosomes to degrade proteins and organelles. Autophagy maintains a low level of autophagy. Autophagy can be rapidly up-regulated under internal and external pressure to maintain cell homeostasis. Recent studies have shown that autophagy plays a "double-edged sword" role in cancer treatment. Autophagy can improve the viability of tumor cells and accelerate cell death in the treatment of tumors. Whether or not amides induce autophagy in larynx cells, and the role of autophagy in it has not been reported. Methods: 1, MTT assay was used to detect the cytotoxicity of asparaginase to Tu212 and Tu686 in laryngeal cancer cells, and the toxicity of chloroquine (CQ) combined with autophagic inhibitor (CQ), and the detection of antioxidant N- acetyl -L- cysteine (NAC) in asparaginase to larynx cancer The effect of cell growth; 2, flow cytometry to detect apoptosis. The effect of asparaginase alone, combined with autophagy inhibitor CQ on apoptosis of Tu212 and Tu686 cells; the effect of antioxidant NAC on asparaginase induced apoptosis in larynx cells; 3, transmission electron microscopy (TEM) observed the autophagy induced by asparaginase in Tu212 and Tu686 cells. 4, Western blot method was used to detect the expression of asparagine synthetase (ASNS) in Tu212 and Tu686 cells; the expression of autophagic specific protein LC3-II in larynx cells was detected by the action of asparaginase alone and combined with CQ; changes in the expression of apoptosis related protein Caspase 3, PARP expression; 5, laser confocal microscopy (Conf) Ocal microscopy) detects the production of autophagy and autophagic flow. Results: the expression of asparagine synthetase in Tu212 and Tu686 of larynx cancer cells was missing; asparaginase was killed by asparagine by exhaustion of asparagine. Asparaginase induced significant apoptosis in larynx cancer cells and induced apoptosis related eggs. White Caspase 3, PARP shear, and Caspase inhibitor z-VAD-fmk obviously weaken the apoptosis of Tu212 and Tu686 cells induced by asparaginase, so the apoptosis induced by asparaginase is dependent on the Caspase pathway. Asparaginase can induce the appearance of autophagic in the larynx cells, induce the expression of LC-II, and the production of autophagic flow. The inhibition of autophagy accompanied by the signaling pathway Akt/mTOR and the activation of the signal pathway Erk1/2 indicate that the Akt/mTOR signaling pathway and the Erk1/2 signaling pathway participate in the molecular regulation mechanism of the autophagy induced by asparaginase in larynx cells. It is worth noting that the combination of autophagy inhibitor CQ on larynx cells significantly increases the asparaginase to the larynx. The growth inhibition and apoptosis of Tu212 and Tu686 cells in cancer cells showed that the autophagy played a protective role in the process of the action of asparaginase on Laryngocarcinoma Cells that day. Antioxidant NAC could significantly inhibit the autophagy induced by asparagine, and the cytotoxicity of asparagine caused by asparagine was also significantly weakened, indicating that ROS was in asparagine. Aminase induced autophagy and cytotoxicity play an important role. To sum up, asparaginase has significant cytotoxicity to Tu212 and Tu686 in larynx cells. Asparaginase can induce autophagy in laryngeal cancer cells. Inhibition of autophagy significantly enhances the killing effect of asparaginase on laryngeal cancer cells. Therefore, a new thought is provided for the treatment of larynx cancer. Road.
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.65

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本文編號：1974767