發(fā)布時間：2018-06-02 23:22

  本文選題：糖尿病性角膜病變 + 間充質(zhì)干細(xì)胞��； 參考：《青島大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的:隨著糖尿病人群增多,糖尿病性角膜病變也逐漸成為眼科常見病,其發(fā)病機(jī)制與炎癥反應(yīng)紊亂、干細(xì)胞功能障礙等諸多因素相關(guān)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs)是一類具有抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用的成體干細(xì)胞。本課題通過移植BM-MSCs至鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的I型糖尿病小鼠球結(jié)膜下,研究BM-MSCs促進(jìn)糖尿病小鼠角膜上皮再生的分子機(jī)制。方法:1.通過腹腔注射STZ建立I型糖尿病小鼠100只,建模14-16周后使用;采用骨片種植法分離小鼠原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并傳代培養(yǎng)。2.糖尿病小鼠角膜上皮刮除后行球結(jié)膜下BM-MSCs移植,并以正常小鼠及PBS注射糖尿病小鼠做對照。每日通過裂隙燈觀察角膜上皮愈合情況,免疫熒光檢測地高辛(Dil)標(biāo)記的BM-MSCs在角膜中的歸巢、角膜中Ly-6g(+)中性粒細(xì)胞比例和抗炎因子腫瘤壞死因子α刺激蛋白-6(TSG-6)的表達(dá)分布情況;Ki67染色觀察角膜上皮細(xì)胞的分裂、增殖;進(jìn)一步通過ELISA分析TSG-6在角膜上皮刮除前、后表達(dá)量的差異。3.進(jìn)一步檢測TSG-6結(jié)膜下注射對糖尿病小鼠角膜上皮再生的影響。裂隙燈觀察角膜上皮修復(fù)情況;免疫熒光檢測炎癥因子環(huán)氧化酶-2(COX2)、中性粒細(xì)胞標(biāo)記物L(fēng)y-6g染色情況;巨噬細(xì)胞CD68/CD206標(biāo)志物表達(dá)及比例情況;q RT-PCR定量檢測創(chuàng)傷后期角膜中炎癥因子的表達(dá)情況。結(jié)果:1.BM-MSCs移植糖尿病小鼠角膜上皮再生速度明顯快于對照糖尿病小鼠,并在角膜淺基質(zhì)層發(fā)現(xiàn)少量BM-MSCs歸巢,且角膜上皮細(xì)胞分裂、增殖較對照糖尿病小鼠更活躍;BM-MSCs移植組角膜中的中性粒細(xì)胞顯著少于對照糖尿病小鼠;角膜上皮損傷后,正常小鼠角膜中TSG-6的表達(dá)量顯著上調(diào),糖尿病小鼠較正常小鼠顯著降低,而BM-MSCs移植可顯著恢復(fù)TSG-6的表達(dá)。2.球結(jié)膜下注射TSG-6可顯著促進(jìn)糖尿病小鼠角膜上皮的損傷修復(fù),抑制角膜中性粒細(xì)胞的侵潤,下調(diào)COX2的表達(dá);q RT-PCR結(jié)果顯示TSG-6可顯著降低糖尿病小鼠角膜中的炎癥因子誘導(dǎo)性一氧化氮合酶(i NOS)、COX2的表達(dá);而促進(jìn)抑制炎癥的細(xì)胞因子IL-10及精氨酸酶(Arg-1)的表達(dá)。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),與正常小鼠相比,糖尿病小鼠角膜損傷后,遷移到角膜中的CD45陽性的免疫細(xì)胞數(shù)量顯著上升,且促炎的M1型巨噬細(xì)胞(CD45(+)/F4/80(+)CD86(+))比例顯著增加,而促修復(fù)的M2型巨噬細(xì)胞(CD45(+)/F4/80(+)CD206(+))比例顯著減少;BM-MSCs移植或TSG-6結(jié)膜下注射可顯著抑制糖尿病小鼠角膜損傷后免疫細(xì)胞的侵潤,且提高M(jìn)2型巨噬細(xì)胞的比例。結(jié)論:1.BM-MSCs移植顯著促進(jìn)糖尿病小鼠角膜上皮損傷修復(fù):BM-MSCs可歸巢至角膜損傷部位,提高角膜中TSG-6的表達(dá),抑制中性粒細(xì)胞侵潤,促進(jìn)糖尿病小鼠角膜上皮細(xì)胞分裂、增殖,促進(jìn)角膜上皮修復(fù)。2.TSG-6顯著促進(jìn)糖尿病小鼠角膜上皮修復(fù):TSG-6可抑制中性粒細(xì)胞的侵潤,降低炎癥因子的表達(dá),促進(jìn)抑炎因子表達(dá),促進(jìn)角膜上皮修復(fù)。3.糖尿病小鼠巨噬細(xì)胞功能異常:角膜上皮損傷后,角膜中的巨噬細(xì)胞致炎性M1型比例升高,促修復(fù)的M2型比例下調(diào);而BM-MSCs移植和TSG-6結(jié)膜下注射可顯著改善M1/M2巨噬細(xì)胞的比例。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of BM - MSCs on corneal epithelium regeneration in diabetic mice . 2 . The effect of TSG - 6 on corneal epithelial repair in diabetic mice was promoted : TSG - 6 inhibited the invasion of neutrophils , reduced the expression of inflammatory factors , promoted the expression of inflammatory factors , promoted the expression of inflammatory factors , promoted the expression of anti - inflammatory factors , promoted the expression of inflammatory factors , promoted the reduction of corneal epithelium repair .
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2;R772.2

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本文編號：1970574