發(fā)布時間：2018-06-01 13:13

  本文選題：變應性鼻炎 + 變應原�。� 參考：《華中科技大學》2015年博士論文

【摘要】：研究背景與目的 變應性鼻炎(Allergic rhinitis, AR)被認為是一個全球性的健康問題,導致巨大的社會負擔。然而,AR的發(fā)病機制目前并沒有完全闡明,對其治療也并不十分理想,各種療法均存在一定局限。因此,對AR早期預防方面的研究是目前的一個熱點,生命早期變應原免疫干預是其中值得關注的一個方向。 在臨床實踐中,變應原特異性免疫治療通過變應原不同劑量刺激而實現(xiàn)。其中大劑量變應原可誘導良好的免疫耐受,而小劑量變應原則沒有顯著效果,提示不同劑量的變應原作用可產(chǎn)生不同的免疫效應。近年來,一些研究表明,生命早期的環(huán)境變應原暴露可能影響未來變應性疾病的發(fā)展。流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn),生命早期高濃度的變應原暴露對將來變應性疾病發(fā)生可能具有保護作用,但具體機制卻不明確,也缺乏這方面的研究。眾所周知,變應原進入機體,首先為抗原呈遞細胞(antigen-presenting cell, APC)所吞噬,加工處理成抗原肽的形式,將其呈遞給初始T細胞,從而介導T細胞的分化。研究表明,樹突狀細胞(dendritic cell, DC)在受到外界刺激因素及局部微環(huán)境等的影響下,呈現(xiàn)不同的成熟分化狀態(tài)。變應原的劑量差異亦有可能作為一種外界干擾因素,對DC成熟狀態(tài)造成影響。而最新的一些研究也表明,DC的不同成熟狀態(tài)對T細胞分化方向可有極大影響。因此,我們認為DC可能在生命早期變應原干預中扮演關鍵角色。 在我們的設計中,變應原劑量作為唯一的差異因素,所形成的T細胞免疫記憶方向卻不同。而變應原只可能先通過DC的抗原呈遞作用,才能觸發(fā)后續(xù)的反應。因此極有可能是不同劑量變應原免疫干預后,通過影響DC的不同成熟狀態(tài),進而對T細胞分化方向及后期的免疫效應造成影響。鼻腔黏膜中含有豐富的APC(主要是DC)和CD4+T輔助細胞,而目前認為AR的發(fā)病機制與T細胞相關亞群功能平衡失調(diào)密切相關。因此,DC作為體內(nèi)最重要的APC,在AR的發(fā)病機制中必然占有非常重要的地位。在生命早期高濃度變應原暴露可能具有保護作用這一現(xiàn)象基礎上,我們設想在生命早期予以一定劑量變應原主動免疫干預,使機體產(chǎn)生免疫保護作用,從而特異性地預防相應變應原后期接觸致敏,抑制AR的發(fā)生。 本文將在動物實驗中探索不同劑量卵清蛋白(OVA)早期致敏小鼠對其成年后免疫功能的影響,然后在體外試驗中研究不同劑量OVA對DC成熟狀態(tài)的影響及此后對初始T細胞分化方向的影響,從而為生命早期變應原干預提供理論基礎。 方法 1.不同劑量OVA刺激幼年小鼠對其成年時免疫狀態(tài)的影響 BALB/c乳鼠出生后的第1、8、15天給予不同劑量OVA (10μg、1000μg)致敏,第5周OVA激發(fā),一周后處死獲取標本。設對照組,致敏用生理鹽水或氫氧化鋁,激發(fā)用生理鹽水。ELISA檢測血清中OVA特異性IgE、IgG1和IgG2a水平以及脾單個核細胞培養(yǎng)上清中IL-4、IL-10和IFN-γ的含量。2.不同劑量OVA對樹突狀細胞成熟狀態(tài)的影響 BALB/c雌性小鼠,獲取骨髓細胞,在體外用GM-CSF+IL-4聯(lián)合誘導培養(yǎng)骨髓源性樹突狀細胞(BMDC)。培養(yǎng)至第六天,用不同劑量OVA(0、0.1、1、10、100、1000、10000μg/m1)刺激,繼續(xù)培養(yǎng)24小時,收集懸浮和半貼壁細胞,流式細胞術檢測其中DC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和主要組織相容性復合物分子Ⅱ(MHC Ⅱ)的表達水平。 3.樹突狀細胞的成熟分化狀態(tài)對初始T細胞分化方向的影響 BALB/c雌性小鼠,獲取骨髓細胞,在體外用GM-CSF+IL-4聯(lián)合誘導培養(yǎng)BMDC。培養(yǎng)第六天,用不同劑量OVA (010、1000、10000μg/ml)刺激未成熟樹突狀細胞,繼續(xù)培養(yǎng)24小時。取BALB/c雌性小鼠淋巴結(jié),磁珠分選獲得初始T細胞。收獲樹突狀細胞,與分選之初始T細胞混合培養(yǎng)72小時,流式檢測各組CD4+Foxp3+, CD4+T-bet+和CD4+Gata3+細胞比例。 結(jié)果 1.不同劑量OVA刺激幼年小鼠對其成年時免疫狀態(tài)的影響 不同劑量OVA早期致敏小鼠后,6周齡時小劑量組小鼠血清中OVA特異性IgE明顯高于對照組和大劑量組：大劑量組OVA特異性IgE與對照組間無顯著性差異。小劑量組血清OVA特異IgGl相對高于大劑量,而OVA特異性IgG2a則相對低于大劑量組。同時,脾單個核細胞培養(yǎng)上清中細胞因子檢測發(fā)現(xiàn),小劑量組IFN-γ/IL-4比值低于對照組,呈現(xiàn)明顯的Th2方向反應,而大劑量組中則表現(xiàn)為Thl方向:IFN-γ/IL-4明顯高于對照組。 2.不同劑量OVA對樹突狀細胞成熟狀態(tài)的影響 培養(yǎng)6天后,CDllc+細胞比例均大于80%。OVA刺激24小時后,OVA劑量為0、0.1、1和10μg/ml,樹突狀細胞成熟表型CD40、CD80、CD86和MHC Ⅱ均無明顯差異。但當OVA劑量達到100及以上時,各表型表達均明顯提高,且均隨劑量增大而提高。 3.樹突狀細胞的成熟分化狀態(tài)對初始T細胞分化方向的影響 分選細胞中,CD4+CD62L+細胞比例均大于92%。混合淋巴細胞培養(yǎng)72小時后發(fā)現(xiàn)：0和10μg組CD4+Gata-3+細胞比例明顯較高；1000μg組CD4+T-bet+細胞比例明顯較高；而10000μg組CD4+Foxp3+細胞比例明顯增高,CD4+Gata-3+和CD4+T-bet+細胞比例則均明顯下降。 結(jié)論 總之,我們在動物模型中發(fā)現(xiàn)：新生小鼠給予小劑量OVA刺激時,成年后表現(xiàn)出Th2優(yōu)勢的免疫反應；而大劑量OVA刺激時,則形成Thl優(yōu)勢的免疫反應。體外實驗發(fā)現(xiàn)：在一定范圍內(nèi),不同劑量的OVA刺激DC形成不同的成熟狀態(tài),從而促使初始T細胞向不同的方向分化。我們的發(fā)現(xiàn)證實了生命早期高濃度變應原暴露具有保護作用的觀點,更進一步揭示了生命早期大劑量變應原干預產(chǎn)生保護作用的靶點可能在DC上,為變應性鼻炎等變應性疾病的防治提供了新的啟示。
[Abstract]:Background and purpose of study

Allergic rhinitis ( AR ) is considered to be a global health problem , which leads to a huge social burden . However , the pathogenesis of AR is not fully elucidated , and it is not ideal for its treatment .

In recent years , some studies have shown that allergen exposure in early life may have a protective effect on the development of allergic diseases . In recent years , some studies have shown that allergen exposure in early life may have a protective effect on the development of allergic diseases in the future .

In our design , allergen dosage is the only difference factor , and the direction of immune memory of T cells is different . It is possible to trigger subsequent responses by the antigen presentation of DC . Therefore , it is very likely that the pathogenesis of AR is closely related to the imbalance of T cell - related sub - group function . Therefore , it is believed that the pathogenesis of AR is very important in the pathogenesis of AR .

In this paper , the effects of different doses of OVA on the immune function of adult mice were investigated in animal experiments . Then the effects of different doses of OVA on the maturation of DC were studied in vitro and the effect of OVA on the differentiation direction of initial T cells was studied .

2 . Instrument : LEJ - 2 All - directional M - mode Echocardiogram System , with Echo PAC workstation equipped with GE - 7Dimension color echocardiography diagnostic instrument .

1 . Effects of different doses of OVA on the immune status of young mice in adult mice

BALB / c mice were sensitized with OVA ( 10 渭g , 1000 渭g ) on days 1 , 8 and 15 after birth . The samples were obtained by OVA challenge at 5 weeks . The levels of OVA - specific IgE , IgG1 and IgG 2a in serum and the levels of IL - 4 , IL - 10 and IFN - 緯 were detected by ELISA . The effects of OVA on the maturation of dendritic cells were determined by ELISA .

BALB / c female mice were cultured in vitro with GM - CSF + IL - 4 to induce bone marrow - derived dendritic cells ( BMDC ) . The cells were cultured to the sixth day , stimulated with different doses of OVA ( 0 , 0.1 , 1 , 10 , 100 , 1000 , 10000 渭g / ml ) , then cultured for 24 hours , and suspension and semi - adherent cells were collected , and the expression level of CD40 , CD80 , CD86 and major tissue - compatible complex molecules 鈪，

本文編號：1964302