本文選題：兔角膜緣干細胞 + 體外�。� 參考：《大連醫(yī)科大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的：通過對兔角膜緣干細胞的體外培養(yǎng)，觀察細胞的形態(tài)學，建立兔角膜緣干細胞在體外的培養(yǎng)及鑒定方法。為臨床上應(yīng)用角膜緣干細胞治療相關(guān)性疾病提供了理論依據(jù)及實驗基礎(chǔ)。 方法：大連醫(yī)科大學實驗動物中心提供的兔子。按照所取的組織塊大小，將其分為兩組：I組為5只眼，在顯微鏡下取兔的一小塊角膜緣組織，大小約為1x1mm。Ⅱ組為5只眼，取大小約為2x2mm的角膜緣組織。兩組均采用相同的方法及培養(yǎng)條件對細胞進行培養(yǎng)。 將角膜緣組織用0.25%胰蛋白酶進行消化，加入含有20%胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/m1鏈霉素配成的雙抗混合溶液（兩者的比例為l:1）以及10ng/ml的EGF生長因子的DMEM培養(yǎng)液，放入CO2培養(yǎng)箱（5%CO2，37℃）培養(yǎng)。應(yīng)用光學顯微鏡對培養(yǎng)的細胞以及其生長情況進行觀察，并應(yīng)用角蛋白K3的單克隆抗體AE5對培養(yǎng)的細胞進行免疫化學鑒定。 在體外對兔角膜緣干細胞進行培養(yǎng)，運用顯微鏡對培養(yǎng)的細胞以及其生長情況進行觀察，應(yīng)用角蛋白K3的單克隆抗體AE5對培養(yǎng)的細胞進行免疫化學鑒定。 結(jié)果：本實驗首先在I組5只兔眼的小組織塊角膜緣上方的大小約1x1mm，，去除上皮后獲取前部基質(zhì)層（厚度大約為100μm至150μm），對組織塊進行體外培養(yǎng)，均無細胞生長。探尋無細胞生長的原因，在Ⅱ組5只兔眼我們?nèi)〉氖?x2mm大小，厚度與前相同的角膜緣組織塊采用完全相同的方法進行培養(yǎng)，觀察顯示有細胞生長。 對2x2mm的角膜緣組織塊生長2—3天后對其細胞的生長情況以及形態(tài)進行觀察。細胞生長第2—3天時對其進行觀察發(fā)現(xiàn)：細胞從組織塊邊緣移行出，形成“沙灘樣”移行帶，細胞之間排列比較緊密。培養(yǎng)至第6天時，細胞幾乎貼滿瓶底，細胞體積較小，卵圓形或多邊形為主,細胞核為單核或多核，核質(zhì)比例大。應(yīng)用角蛋白K3的單克隆AE5抗體對培養(yǎng)的細胞進行染色，染色呈陽性的細胞為大多數(shù)，即是角膜上皮細胞，而染色呈陰性的少數(shù)細胞為角膜緣干細胞。 結(jié)論：1.組織塊培養(yǎng)法：1x1mm大小，去除上皮后獲取前部基質(zhì)層（厚度大約為100μm至150μm），對組織塊中幾乎無細胞生長，而2x2mm大小，厚度與前相同的角膜緣組織塊經(jīng)過培養(yǎng)則含有角膜緣干細胞，但干細胞數(shù)量比較少。 2.單克隆抗體AE5可以與角蛋白K3特異性結(jié)合，其可用于對角膜緣干細胞鑒定方法之一。
[Abstract]:Aim: to observe the morphology of rabbit limbal stem cells in vitro and to establish a method for the culture and identification of rabbit limbal stem cells in vitro. It provides a theoretical basis and experimental basis for the clinical application of limbal stem cells in the treatment of related diseases. Methods: rabbits were provided by Experimental Animal Center of Dalian Medical University. According to the size of the tissue mass, it was divided into two groups: group I (5 eyes), and a small piece of limbal tissue of rabbit (1 x 1 mm) under microscope, group 鈪

本文編號：1941402