本文選題：角膜炎 + 不同品系��； 參考：《泰山醫(yī)學院》2012年碩士論文

【摘要】：目的 真菌性角膜炎（Fungal Keratitis, FK）是一種致盲率極高的感染性角膜病，其發(fā)病機理尚未明確。本研究主要選用兩種常見的小鼠品系Balb/c小鼠和C57BL/6小鼠建立實驗性真菌性角膜炎模型，通過比較兩種小鼠在發(fā)病及轉(zhuǎn)歸過程中的表現(xiàn)及各相關(guān)分子的變化水平，進而研究真菌性角膜炎發(fā)病的相關(guān)機制。 方法 選用相同周齡雄性Balb/c小鼠和C57BL/6小鼠，采用角膜基質(zhì)注射法注射1×10~8CFU/ml白色念珠菌孢子1ul建立小鼠的真菌性角膜炎模型。從感染后第1天起每隔1天裂隙燈下觀察、采集圖片，并進行臨床評分。在感染后的不同時間點收集血漿和受染角膜，組織病理學檢查受染角膜組織中炎性細胞的浸潤及真菌的生長情況，真菌負荷實驗檢測受染角膜組織中真菌孢子含量（載菌量），酶聯(lián)免疫吸附劑測定實驗（ELISA）檢測血漿和受染角膜勻漿液中IL-17、IFN-γ的含量，實時定量PCR檢測受染角膜組織中基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制因子（MMPs，TIMPs）和膠原纖維等分子基因表達水平的變化，免疫熒光技術(shù)驗證感染后第1天受染角膜內(nèi)IL-17分子的表達情況。 結(jié)果 兩種品系的小鼠在角膜基質(zhì)注射1×105白色念珠菌孢子后均感染了嚴重的角膜炎。在感染早期，小鼠角膜水腫、潰瘍，后期病情減退。但相比于Balb/c小鼠，C57BL/6小鼠誘導CaK后在相應(yīng)各時間點的平均疾病分數(shù)更高（P＜0.05）；且在感染后期Balb/c小鼠受染角膜逐漸恢復(fù)透明性，趨于正常狀態(tài)；而C57BL/6小鼠直至第30天仍可見較大的角膜斑翳。角膜組織病理學檢查結(jié)果顯示C57BL/6小鼠的白念菌性角膜炎直至感染后的第14天仍有大量的炎性細胞浸潤，基質(zhì)層機化仍很明顯，而相應(yīng)時間點Balb/c小鼠角膜內(nèi)炎性細胞浸潤量已明顯減少（P＜0.05），基質(zhì)層細胞數(shù)有所減少，角膜厚度趨于正常。真菌負荷檢測結(jié)果顯示兩種品系小鼠受染角膜真菌負荷數(shù)隨著天數(shù)的推移呈現(xiàn)明顯的下降趨勢，，至感染后第10天，真菌負荷數(shù)趨于0。但C57BL/6小鼠在相應(yīng)各時間點角膜組織菌落計數(shù)都較Balb/c小鼠多（P＜0.05）。ELISA結(jié)果顯示感染早期兩種品系小鼠血漿及受染角膜組織中均有較高水平IL-17的表達，中后期IL-17的表達下降，IFN-γ的表達量則明顯升高。感染早期，C57BL/6小鼠血漿及受染角膜組織中IL-17的表達量均明顯高于Balb/c小鼠（P＜0.05）；而在感染中后期C57小鼠血漿及受染角膜組織中IFN-γ的表達量明顯低于Balb/c小鼠（P＜0.05）。免疫熒光技術(shù)檢測進一步驗證了ELISA的檢測結(jié)果，即在白色念珠菌性角膜炎早期（24h），受染角膜便可檢測到大量的IL-17，且C57BL/6小鼠角膜內(nèi)IL-17的表達明顯多于Balb/c小鼠。RT-PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種品系小鼠受染角膜組織中大多數(shù)基因表達水平存在動態(tài)變化，MMP-8，MMP-9，TIMP-1于感染后的第3天迅速升高并達到高峰，這一現(xiàn)象在兩種品系小鼠的檢測結(jié)果中都可以觀察到，但在C57BL/6小鼠角膜內(nèi)這三個因子的表達量明顯高于Balb/c小鼠（P＜0.05）；TIMP-2、Col3a1及Col4a1的表達略有增高，其中Balb/c小鼠受染角膜內(nèi)Col3a1和Col4a1的表達量明顯高于C57BL/6小鼠（P＜0.05）；Cak的中期，可見Col3a1和Col4a1的表達量繼續(xù)升高并達到高峰，且Balb/c小鼠依然明顯高于C57BL/6小鼠（P＜0.05），MMP-2、MMP-13和TIMP-2緩慢升高，而MMP-8，MMP-9及TIMP-1的表達量則明顯下降（P＜0.05）；后期，除了MMP-2、MMP-13和TIMP-2的表達量升高以外，其他因子的表達水平均較低。 結(jié)論 遺傳背景不同的小鼠感染真菌性角膜炎后表現(xiàn)不同，炎性因子IL-17、IFN-γ及損傷修復(fù)相關(guān)因子MMPs、TIMPs和膠原纖維等在其中發(fā)揮重要的作用，關(guān)于各種分子在真菌性角膜炎中的確切功能及細胞來源還需進一步的研究。
[Abstract]:Purpose

In this study , two common mouse strains Balb / c mice and C57BL / 6 mice were selected to establish an experimental fungal keratitis model .

method

The expression of IL - 17 and IFN - 緯 in the infected corneal tissue was determined by the method of corneal stroma injection . The levels of IL - 17 and IFN - 緯 were collected from the infected corneal tissue at different time points after infection , and the expression of IL - 17 and IL - 17 in the infected cornea was detected by immunofluorescence technique .

Results

Compared with Balb / c mice , C57BL / 6 mice induced CaK at the corresponding time points higher than those in Balb / c mice ( P < 0.05 ) .
In the later stage of infection , Balb / c mice infected with cornea gradually restored the transparency and tended to be in normal state ;
The results showed that there was a significant decrease of IL - 17 in the cornea of C57BL / 6 mice ( P & lt ; 0.05 ) , and the expression of IL - 17 decreased significantly in both strains of C57BL / 6 mice . The levels of IL - 17 in the plasma and infected corneal tissues of C57BL / 6 mice were significantly higher than those in Balb / c mice ( P < 0.05 ) .
Compared with Balb / c mice , the expression of IL - 17 in cornea of C57BL / 6 mice was significantly higher than that in Balb / c mice ( P < 0.05 ) .
The expressions of TIMP - 2 , Col3a1 and Col4a1 increased slightly , and the expression of Col3a1 and Col4a1 in Balb / c mice was significantly higher than that in C57BL / 6 mice ( P < 0.05 ) .
The expressions of MMP - 2 , MMP - 13 and TIMP - 2 in Balb / c mice were significantly higher than those in C57BL / 6 mice ( P & lt ; 0.05 ) , while MMP - 8 , MMP - 9 and TIMP - 1 decreased significantly ( P & lt ; 0.05 ) .
In the later stage , the expression level of MMP - 2 , MMP - 13 and TIMP - 2 increased , and the expression level of other factors was lower .

Conclusion

The expression of IL - 17 , IFN - 緯 and the related factors of MMP - 3 , TIMPs and collagen fibers play an important role in the pathogenesis of fungal keratitis , and the exact function of various molecules in fungal keratitis and the source of cells need further study .

【學位授予單位】：泰山醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R772.21

【共引文獻】

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本文編號：1873656