本文選題：miRNA + miR-24-3p��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的:淚腺腺樣囊性癌(lacrimal adenoid cystic carcinoma)是淚腺最常見的惡性上皮性腫瘤,其發(fā)生率僅次于淚腺多形性腺瘤。淚腺腺樣囊性癌有高度惡性,早期難發(fā)現(xiàn),易復(fù)發(fā),嗜神經(jīng)侵襲,易遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的特點,這些特點和復(fù)雜的眼眶解剖學(xué)結(jié)構(gòu)導(dǎo)致癌癥早期切除和完全切除是很困難的。這也是淚腺腺樣囊性癌預(yù)后差的主要原因。大量研究證實mi RNAs調(diào)控多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移。mi RNAs對淚腺腺樣囊性癌的惡性生物學(xué)行為的影響及其具體機制尚不明確。mi RNAs是一類大小約為22nt的非編碼小RNA,其可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控相應(yīng)基因的表達。mi RNAs可通過調(diào)控多種基因的表達,既包括癌基因也包括抑癌基因,進而影響腺樣囊性癌細(xì)胞的生物學(xué)功能,包括細(xì)胞活性,增殖,遷移和侵襲能力等。本課題著重研究mi RNAs對淚腺腺樣囊性癌生物學(xué)行為的影響及其具體機制,為腺樣囊性癌的治療提出可能的新靶點。方法:首先通過基因芯片技術(shù)和qRT-PCR發(fā)現(xiàn)在淚腺腺樣囊性癌組織中,相較于正常組織,存在差異表達的mi RNAs。在這些mi RNAs中選擇mi R-24-3p作為研究對象;首先我們構(gòu)建了mi R-24-3p的過表達質(zhì)粒,合成了封閉質(zhì)粒ASO-mi R-24-3p,檢測mi R-24-3p對腺樣囊性癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,包括MTT實驗檢測mi R-24-3p對腺樣囊性癌細(xì)胞活性的影響,克隆形成實驗檢測mi R-24-3p對體外增殖的影響,以及Transwell遷移和侵襲實驗檢測mi R-24-3p對癌細(xì)胞遷移、侵襲的影響。通過FACS和western blot實驗驗證mi R-24-3p對腺樣囊性癌細(xì)胞凋亡和EMT過程的影響。通過生物學(xué)軟件預(yù)測相應(yīng)靶基因,并通過以上實驗方法研究靶基因?qū)ο贅幽倚园┘?xì)胞的影響。接下來通過挽救實驗證實mi R-24-3p通過直接作用于靶基因來調(diào)控腺樣囊性癌的生物學(xué)行為。靶基因被確定參與p53/p21信號通路,證實了mi R-24-3p可通過影響靶基因的表達來調(diào)控p53/p21信號通路。結(jié)果:通過基因芯片技術(shù)和實時定量PCR發(fā)現(xiàn)在淚腺腺樣囊性癌中,miR-24-3p在癌組織中的表達明顯低于癌旁正常組織,且在高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株ACC-M中的表達明顯低于低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株ACC-2。對腺樣囊性癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的研究中發(fā)現(xiàn),mi R-24-3p抑制腺樣囊性癌細(xì)胞的生長活性,增殖,遷移和侵襲,促進細(xì)胞凋亡,抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程。通過生物學(xué)信息預(yù)測相關(guān)的靶基因,綠色熒光EGFP報告載體和western blot實驗確定PRKCH是mi R-24-3p的直接靶基因,mi R-24-3p與PRKCH 3’UTR端結(jié)合后下調(diào)其表達;實時定量PCR和western blot實驗證明mi R-24-3p可以對內(nèi)源性靶基因PRKCH的表達產(chǎn)生抑制。靶基因PRKCH可促進腺樣囊性癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為,挽救實驗證實靶基因PRKCH可逆轉(zhuǎn)mi R-24-3p對腺樣囊性癌的抑制作用。進一步利用實時定量PCR和western blot實驗證實mi R-24-3p通過調(diào)控靶基因的表達參與p53/p21信號通路。結(jié)論:mi R-24-3p抑制腺樣囊性癌細(xì)胞的細(xì)胞活性、增殖、遷移、侵襲等惡性生物學(xué)行為,起著抑癌基因的作用。該抑癌作用至少部分是通過靶定基因PRKCH,下調(diào)基因PRKCH的表達來實現(xiàn)的。實驗進一步證實PRKCH可負(fù)性調(diào)控p53/p21信號通路,而mi R-24-3p通過靶基因PRKCH參與p53/p21信號通路的調(diào)控。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of mi - RNAs on the biological behavior of salivary gland - like cystic carcinoma , including cell activity , proliferation , migration and invasion ability . The expression of the target gene PRKCH is regulated by means of real - time quantitative PCR and western blot .

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.7

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本文編號：1832581