本文選題：準分子激光角膜磨鑲術(shù) + 瓣皺褶��； 參考：《重慶醫(yī)科大學》2016年博士論文

【摘要】：背景近年來屈光手術(shù)發(fā)展迅速,準分子激光原位角膜磨鑲術(shù)(laser in situ keratomileusis,LASIK)因其痛苦輕、術(shù)后視力恢復(fù)快、視力的可預(yù)測性好等優(yōu)點已經(jīng)普遍用于臨床,但是LASIK術(shù)后特有的角膜瓣相關(guān)的一系列并發(fā)癥仍是目前LASIK運用的主要顧慮之一,其中角膜瓣的皺褶較為常見。目前,關(guān)于角膜瓣皺褶的研究僅局限于分類、病因病機、處理和預(yù)防等臨床方面,而針對角膜瓣皺褶的基礎(chǔ)研究報導甚少。故運用組織病理學方法觀察角膜瓣皺褶組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)學方面的改變,比較單純LASIK術(shù)后和LASIK術(shù)后角膜瓣皺褶的愈合情況差異,從而為指導臨床提供可靠的科學依據(jù)是非常必要的。目的觀察LASIK術(shù)后角膜瓣皺褶與單純LASIK術(shù)后角膜的組織形態(tài)差異,分析LASIK術(shù)后角膜瓣皺褶與單純LASIK術(shù)后角膜細胞酶活性和細胞因子的表達差異以及創(chuàng)傷愈合反應(yīng)的不同,并且對兔子眼角膜的轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)進行分析,找出可能與角膜瓣皺褶相關(guān)的顯著差異表達基因,為臨床治療角膜瓣皺褶提供理論依據(jù)。方法新西蘭白兔14只,分為7組,每組2只,其中一只全麻下右眼LASIK術(shù)后人為造成瓣皺褶作為試驗組,另一只左眼行單純LASIK術(shù)作為對照組。在術(shù)后1天、3天、1周、2周、1月、3月和6月時隨機選取一組處死取角膜,行蘇木素-伊紅(HE)染色、過碘酸-雪夫氏(PAS)染色、Masson三重染色和免疫組織化學染色,做組織形態(tài)學觀察。采用冰凍切片檢測角膜上皮細胞的三磷酸腺苷酶(Adenosine triphosphatase,ATP)、葡萄糖-6-磷酸酶(Glucose-6-phosphatase,G-6-P酶)活性的變化;并對角膜基質(zhì)細胞進行凋亡情況檢測及周邊角膜上皮增殖細胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫組織化學檢測,探討對照組與皺褶組的角膜細胞的生理活性及機制;檢測角膜基質(zhì)細胞數(shù)量以及白細胞介素1(IL-1β)和轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β2)的表達情況來分析LASIK術(shù)后角膜瓣皺褶對角膜基質(zhì)細胞數(shù)目和早期角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)的影響。另外,對兔角膜轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)進行分析,篩選對照組與皺褶組之間的差異表達基因,并對差異表達基因的功能進行聚類,分析差異表達基因編碼蛋白的相互作用關(guān)系。結(jié)果對照組在術(shù)后早期光鏡下見角膜瓣上上皮及瓣下膠原纖維排列較為規(guī)則,上皮基底膜有細小皺褶,至術(shù)后二周時皺褶平緩并逐漸消失,PAS及Masson染色未見明顯陽性深染,免疫組織化學染色見術(shù)后1個月之內(nèi)有三型膠原表達,以角膜瓣邊緣上皮栓下尤為明顯。角膜瓣皺褶組在術(shù)后1天時上皮基底膜呈不規(guī)則波浪形改變,至一周時角膜瓣下層間交界面基質(zhì)膠原纖維排列紊亂,角膜基質(zhì)全層存在活化的角膜細胞,至術(shù)后2周時,上皮層數(shù)不等,在波峰處變薄為2-3層,波谷處可增厚至8-12層,還可見2"3全角膜基質(zhì)膠原纖維出現(xiàn)與角膜瓣上皺褶一致的波浪狀走行,術(shù)后1-6個月時角膜上皮及基質(zhì)部改變基本同前,角膜瓣下層間模糊不可分辨。PAS染色顯示在各時間點角膜瓣下層間深染,Masson染色顯示角膜瓣下層間呈棕色深染。免疫組織化學染色見術(shù)后1周至3個月時時角膜瓣下有三型膠原染色。LASIK術(shù)后皺褶組的角膜上皮細胞ATP酶、G-6-P酶活性和角膜上皮PCNA陽性細胞數(shù)與單純LASIK術(shù)對照組的差異無統(tǒng)計學意義;LASIK術(shù)后5天和7天時,皺褶組的角膜基質(zhì)細胞凋亡數(shù)量明顯比對照組的多;在LASIK術(shù)后的一周內(nèi),對照組的角膜基質(zhì)細胞數(shù)目比皺褶組的多,并且在術(shù)后5天和7天時,皺褶組角膜基質(zhì)細胞中的IL-1β表達明顯比對照組的高,差異具有統(tǒng)計學意義;在LASIK術(shù)后1天、3天、5天和7天時,皺褶組和對照組角膜上皮細胞中的TGF-β2表達差異均無統(tǒng)計學意義。此外,LASIK皺褶模型組與對照組的顯著差異表達基因有210個,其中98個上調(diào),112個下調(diào);功能聚類顯示,差異表達基因主要與一些分子結(jié)合功能、催化活性功能以及細胞生物學功能相關(guān);通過PPI網(wǎng)絡(luò)及模塊分析,下調(diào)基因(如ITGA2)和上調(diào)基因(如EGFLAM、COL1A2和COL1A1)可能與LASIK術(shù)后瓣皺褶的發(fā)生有密切關(guān)系。結(jié)論LASIK術(shù)后角膜瓣皺褶的形態(tài)變化使角膜細胞凋亡情況更嚴重,干擾了角膜上皮及深部基質(zhì)的重塑過程,使得上皮及基質(zhì)形態(tài)均隨皺褶發(fā)生相應(yīng)改變,在一定程度上影響了角膜創(chuàng)口的愈合過程,并且還影響了角膜中一些基因的表達水平。
[Abstract]:Objective To investigate the changes of corneal epithelium in corneal flap after LASIK and to find out the difference between corneal flap and corneal flap after LASIK , and to find out the difference between corneal flap and corneal flap after LASIK . 瀵瑰厰瑙掕啘杞綍緇勬祴搴忔暟鎹繘琛屽垎鏋，

本文編號：1823152