發(fā)布時(shí)間：2018-04-10 17:19

  本文選題：慢性鼻-鼻竇炎 + 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化�。� 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2012年博士論文

【摘要】：第一部分慢性鼻-鼻竇炎(CRS)患者鼻腔/鼻竇黏膜中的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)現(xiàn)象 目的：檢測(cè)慢性鼻-鼻竇炎(CRS)患者和對(duì)照組患者鼻腔/鼻竇黏膜中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)情況,分析CRS與EMT的關(guān)系。 方法：收集2009年9月一2011年2月期間我院耳鼻咽喉科行鼻內(nèi)鏡手術(shù)的患者鼻腔/鼻竇黏膜組織標(biāo)本共39例,其中慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉(CRSwNP)、慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉(CRSsNP)和非CRS患者各13例,Real-timePCR方法檢測(cè)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-p1(TGF-β1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、E-鈣粘附蛋白(E-cadherin)、細(xì)胞纖連蛋白(fibronectin)和波形蛋白(vimentin)的mRNA水平。采用Western blot檢測(cè)上述標(biāo)志物的蛋白表達(dá)水平,以免疫組織熒光方法進(jìn)行蛋白表達(dá)定位。 結(jié)果：與非CRS患者相比,CRSsNP患者鼻腔/鼻竇黏膜組織中α-SMA、TGF-β1、 E-cadherin的mRNA相對(duì)水平升高(P=0.032；P=0.048；P=0.001),而CRSwNP患者的α-SMA、vimentin的mRNA相對(duì)水平下降(P=0.001；P=0.011)；CRSsNP患者的α-SMA、TGF-β1、E-cadherin、MMP-9的蛋白表達(dá)升高(P0.001；P0.001；P=0.006；P=0.033=。CRSsNP組和CRSwNP組比較發(fā)現(xiàn),CRSsNP患者的α-SMA、TGF-β1、E-cadherin、fibronectin、vimentin的mRNA相對(duì)水平較高(P=0.000；P=0.038；P=0.005；P=0.000；P=0.000),蛋白水平呈現(xiàn)相似的趨勢(shì)。免疫組織熒光檢測(cè)證實(shí)a-SMA和角蛋白主要表達(dá)于鼻腔/鼻竇黏膜組織的上皮層和基底膜。在mRNA水平,a-SMA與TGF-β1、fibronectin、vimentin的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.443,P=0.005；r=0.596,P=0.000；r=0.501,P0.001)；在蛋白水平,a-SMA與TGF-β1、MMP-9、E-cadherin、fibronectin的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.918,P=0.000；r=0.415,P=0.009；r=0.395,P=0.013；r=0.486,P=0.002)。 結(jié)論：CRSsNP患者鼻腔/鼻竇黏膜組織中a-SMA表達(dá)增加,并與TGF-β1、MMP-9、fibronectin表達(dá)增強(qiáng)呈正相關(guān),提示EMT可能是CRSsNP的發(fā)病機(jī)制之一。而在CRSwNP患者,a-SMA的表達(dá)較正常下降,提示在CRSwNP患者的鼻腔/鼻竇黏膜組織中可能不存在EMT現(xiàn)象。 第二部分EMT在CRS中的意義及其對(duì)鼻內(nèi)鏡手術(shù)預(yù)后的影響 目的：研究上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)在CRS中的意義及其對(duì)鼻內(nèi)鏡術(shù)后CRS預(yù)后的影響。 方法：所有入組病例行內(nèi)鏡下鼻竇手術(shù)(ESS)。術(shù)前收集第一部分中26個(gè)CRS患者的臨床資料,包括病程,是否伴有過(guò)敏性鼻炎、哮喘、阿司匹林過(guò)敏、胃食管返流,有無(wú)鼻竇手術(shù)史,吸煙史等,對(duì)患者的CRS癥狀進(jìn)行RSOM-31評(píng)分；體格檢查確定是否伴有鼻息肉；對(duì)術(shù)前鼻竇CT進(jìn)行Lund-Mackay評(píng)分,進(jìn)行Lund-Kennedy內(nèi)鏡評(píng)分。術(shù)后隨訪26例患者進(jìn)行癥狀(RSOM-31評(píng)分)和體征(Lund-Kennedy內(nèi)鏡評(píng)分),評(píng)價(jià)預(yù)后。統(tǒng)計(jì)分析EMT的標(biāo)志物α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)與術(shù)前搜集所得臨床數(shù)據(jù)的相關(guān)性,評(píng)估EMT在CRS中的意義；分析α-SMA與術(shù)后患者癥狀、內(nèi)鏡評(píng)分的相關(guān)性評(píng)價(jià)EMT對(duì)CRS患者預(yù)后的影響。 結(jié)果：除吸煙史(r=-0.402,P=0.042)外,患者是否伴有過(guò)敏性鼻炎、哮喘、阿司匹林過(guò)敏、胃食管返流以及鼻竇手術(shù)史、病程等均不影響EMT的發(fā)生,但是血清總IgE呈現(xiàn)與EMT負(fù)相關(guān)的趨勢(shì)(r=-0.371,P=0.062)；前組篩竇的CT評(píng)分與α-SMA蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.389,P=0.049)；術(shù)前各項(xiàng)癥狀的評(píng)分與α-SMA蛋白表達(dá)水平?jīng)]有明顯的相關(guān)性；而術(shù)后嗅覺(jué)下降、聽(tīng)力減退、感覺(jué)疲勞、工作能力下降等癥狀的評(píng)分與α-SMA蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.472,P=0.015；r=-0.413,P=0.036；r=-0.537,P=0.005；r=-0.420,P=0.033)；術(shù)前內(nèi)鏡評(píng)分總分、術(shù)后息肉評(píng)分、分泌物評(píng)分、內(nèi)鏡評(píng)分總分與α-SMA蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.408,P=0.038；r=-0.439,P=0.025；r=-0.421,P=0.032；r=0.640,P0.001)。 結(jié)論：病變涉及其他鼻竇而未涉及前組篩竇的CRS患者可能較容易發(fā)生EMT；EMT雖然與術(shù)前各種癥狀不具相關(guān)性,但是可能影響患者術(shù)后的嗅覺(jué)、聽(tīng)力改善以及疲勞、工作能力下降等癥狀。EMT與內(nèi)鏡評(píng)分呈負(fù)相關(guān),并影響術(shù)后息肉和分泌物等內(nèi)鏡下體征的改變。 第三部分CRS鼻腔/鼻竇黏膜原代上皮細(xì)胞體外模型的建立 目的：建立慢性鼻-鼻竇炎(CRS)鼻腔/鼻竇黏膜原代上皮細(xì)胞模型。 方法：于內(nèi)鏡下鼻竇手術(shù)術(shù)中取息肉、中鼻甲或者鉤突黏膜組織,過(guò)夜消化,分別以差速貼壁+胰酶消化法和免疫磁珠分選法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),分別以免疫熒光標(biāo)記角蛋白抗體半定量法和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)兩種方法培養(yǎng)的上皮細(xì)胞純度。 結(jié)果：免疫熒光定量法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)免疫磁珠分選法培養(yǎng)上皮細(xì)胞的純度為89.3%；差速貼壁+胰酶消化法培養(yǎng)的上皮細(xì)胞純度為85.6%；而流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)免疫磁珠分選法培養(yǎng)的上皮細(xì)胞純度可以達(dá)到92.12%；差速貼壁+胰酶消化法培養(yǎng)的上皮細(xì)胞純度可以達(dá)到78.37%；符合上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的要求。 結(jié)論：差速貼壁+胰酶消化法和免疫磁珠分選法兩種細(xì)胞純化、培養(yǎng)方法均可以建立純度較高的人類鼻腔/鼻竇黏膜原代上皮細(xì)胞模型,為進(jìn)一步的功能學(xué)實(shí)驗(yàn)奠定了模型基礎(chǔ)。 第四部分轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)誘導(dǎo)的EMT研究 目的：通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證人類鼻腔/鼻竇黏膜上皮細(xì)胞可以發(fā)生EMT。 方法：采用差速貼壁+胰酶消化法或免疫磁珠分選法培養(yǎng)出純度較高的上皮細(xì)胞,以10ng/ml的TGF-β1誘導(dǎo)上皮細(xì)胞發(fā)生EMT,用相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化,用免疫熒光雙標(biāo)(α-SMA和角蛋白)檢測(cè)發(fā)生EMT的細(xì)胞；以不同濃度(1ng/ml、5ng/ml和10ng/ml)的TGF-β1誘導(dǎo)上皮細(xì)胞,Western blot檢測(cè)EMT相關(guān)標(biāo)志物α-SMA和E-cadherin的蛋白表達(dá)；劃痕實(shí)驗(yàn)觀察TGF-β1誘導(dǎo)后的上皮細(xì)胞的遷移能力；Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TGF-β1誘導(dǎo)后的上皮細(xì)胞的侵襲能力。 結(jié)果：經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)后的上皮細(xì)胞形態(tài)變化明顯；免疫熒光雙標(biāo)顯示同時(shí)標(biāo)記上皮細(xì)胞標(biāo)志物角蛋白和肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA的細(xì)胞；Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)TGF-β1誘導(dǎo)后的細(xì)胞E-cadherin表達(dá)下降,α-SMA表達(dá)上調(diào)；劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TGF-β1誘導(dǎo)后的上皮細(xì)胞的遷移能力明顯升高；Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TGF-β1誘導(dǎo)后的細(xì)胞并未獲得侵襲性表型。 結(jié)論：在TGF-β1的誘導(dǎo)作用下鼻腔/鼻竇黏膜的原代上皮細(xì)胞可以發(fā)生EMT,TGF-β1誘導(dǎo)后的上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞,遷移能力增強(qiáng),體外水平驗(yàn)證EMT可能是CRS的發(fā)病機(jī)制之一。
[Abstract]:Epithelial - mesenchymal transition ( EMT ) in nasal / nasal mucosa of patients with chronic sinusitis ( CRS ) in the first part

Objective : To detect the expression of epithelial - mesenchymal transition ( EMT ) - related markers in nasal / nasal sinus mucosa of patients with chronic nasal - sinusitis ( CRS ) and control group , and to analyze the relationship between CRS and EMT .

Methods : A total of 39 cases of nasal / nasal sinus mucosal tissue were collected from September 2011 to February 2011 in the nasal / nasal sinus mucosa of our hospital . The mRNA levels of 偽 - smooth muscle actin ( a - SMA ) , transforming growth factor - p1 ( TGF - 尾1 ) , matrix metalloproteinase - 2 ( MMP - 2 ) , matrix metalloproteinase - 9 ( MMP - 9 ) , E - cadherin ( E - cadherin ) , fibronectin ( fibronectin ) and vimentin were detected by Real - time PCR .

Results : Compared with non - CRS patients , the mRNA level of 偽 - SMA , TGF - 尾1 and E - cadherin in nasal / nasal mucosa of patients with CRSsNP was significantly increased ( P = 0.032 ) .
P=0.048錛，

本文編號(hào)：1732160