發(fā)布時(shí)間：2018-04-04 12:06

  本文選題：人脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞　切入點(diǎn)：miR-　出處：《上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2016年07期

【摘要】：目的探討miR-424在人脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞(h ASC)成骨分化中的表達(dá)及miR-424對h ASC體外成骨分化的生物學(xué)作用。方法 q PCR檢測miR-424在h ASC成骨分化不同階段的表達(dá)水平。通過慢病毒顆粒在體外感染h ASC,使miR-424過表達(dá)或抑制其表達(dá),進(jìn)行Western blotting、細(xì)胞免疫熒光試驗(yàn)及堿性磷酸酶(ALP)和茜素紅(ARS)染色試驗(yàn),研究miR-424對骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(BMP-2)及成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)h ASC成骨分化過程的影響。預(yù)測miR-424的靶基因,并利用q PCR及Western blotting驗(yàn)證。結(jié)果 q PCR結(jié)果顯示miR-424在h ASC的表達(dá)量隨著成骨誘導(dǎo)時(shí)間延長逐漸下降(P0.05)。在BMP-2誘導(dǎo)下,過表達(dá)組的堿性磷酸酶(ALP)和骨橋蛋白(OPN)蛋白水平均下降,而抑制組的表達(dá)增加(P0.05)。細(xì)胞免疫熒光顯示,過表達(dá)miR-424的細(xì)胞骨唾液酸蛋白(BSP)陽性率顯著下降(P0.05)。ALP和ARS染色顯示,過表達(dá)組ALP活性降低,鈣鹽沉積下降,而抑制組ALP活性升高,礦化能力增強(qiáng)。過表達(dá)miR-424能降低h ASC中Smad5的mRNA和蛋白水平,而抑制miR-424則使其水平升高(P0.05)。結(jié)論 miR-424在h ASC成骨分化中表達(dá)下調(diào),其在hASC體外成骨分化過程中起抑制作用。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of miR-424 in osteogenic differentiation of human adipose derived mesenchymal stem cells (hASCs) and the biological effect of miR-424 on in vitro osteogenic differentiation of h ASC.Methods Q PCR was used to detect the expression of miR-424 in different stages of h ASC osteogenesis.MiR-424 was overexpressed or inhibited by infection of lentivirus particles in vitro with Western blotting, cellular immunofluorescence assay and alkaline phosphatase (ALP) and alizarin red ARS staining.To study the effects of miR-424 on bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) and osteogenic induction fluid induced h ASC osteogenic differentiation.The target genes of miR-424 were predicted and verified by Q PCR and Western blotting.Results Q PCR showed that the expression of miR-424 in h ASC decreased gradually with the prolongation of osteogenic time (P 0.05).The levels of alkaline phosphatase (ALP) and osteopontin (OPN) protein decreased in the overexpression group, but increased in the inhibition group.Cell immunofluorescence showed that the positive rate of bone sialic acid protein (miR-424) in overexpression group decreased significantly (P 0.05). ALP and ARS staining showed that ALP activity decreased, calcium salt deposition decreased in overexpression group, ALP activity increased and mineralization ability increased in inhibition group.Overexpression of miR-424 could decrease the level of mRNA and protein of Smad5 in h ASC, while inhibiting miR-424 increased the level of Smad5.Conclusion the expression of miR-424 is down-regulated during h ASC osteogenic differentiation, and it plays an inhibitory role in the process of hASC osteogenic differentiation in vitro.
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院眼科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81470663)~~
【分類號(hào)】：R779.6

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本文編號(hào)：1709883