本文選題：喉鱗狀細(xì)胞癌　切入點(diǎn)：生存素基因　出處：《武漢大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：背景：喉鱗狀細(xì)胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma, LSCC),占所有癌癥的1.5%以及喉癌的絕大部分(約96%),是頭頸部最常見的惡性腫瘤之一,近年來,喉鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病率正在逐漸增加。放療在喉癌的治療中起著重要作用,特別是對(duì)早期階段,這被認(rèn)為是有效的治療方式。早期的喉癌患者通常能夠通過手術(shù)或放療治愈,但是,進(jìn)展期不能手術(shù)的晚期喉癌病人與預(yù)后不良有關(guān)。此外,盡管包括手術(shù)治療、放療和化療在內(nèi)的診斷和治療策略有所進(jìn)展,但是在過去三十年里,喉鱗狀細(xì)胞癌的臨床治療結(jié)果尚未明顯改善,這很大程度與腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移以及抗放化療敏感性有關(guān)。生存素(Survivin)基因位于人類染色體17q25,由單一基因編碼(距離端粒的位置約為3%),是凋亡抑制蛋白(IAP)家族中最小的成員,相對(duì)分子質(zhì)量為16.5 kDo Survivin抑制線粒體凋亡途徑的功能是通過其單一的重復(fù)(BIR)域完成的。但是由于Survivin在細(xì)胞周期中的G2/M期表達(dá),支持細(xì)胞的快速分裂,許多學(xué)者認(rèn)為,Survivin基因的主要功能在于控制細(xì)胞分裂,而不是抑制細(xì)胞凋亡。此外,除了睪丸,胸腺和胎盤外,Survivin通常在大多數(shù)正常成人組織表達(dá)水平極低。但在胎兒發(fā)育過程中,以及包括喉癌在內(nèi)的多數(shù)腫瘤中,生存素廣泛表達(dá)。近年來的研究發(fā)現(xiàn),Survivin與腫瘤細(xì)胞的凋亡密切相關(guān),但是,Survivin在喉鱗狀細(xì)胞癌的放療治療中的相關(guān)作用未見報(bào)道,通過研究Survivin在喉鱗狀細(xì)胞中的作用機(jī)制,可以為臨床研究打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模罕緦?shí)驗(yàn)旨在探討沉默Survivin基因和輻射處理聯(lián)合使用對(duì)喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系的增殖和凋亡的影響,以挖掘Survivin在喉鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中可能扮演的角色,為喉鱗狀細(xì)胞癌的治療、防治提供新的策略。實(shí)驗(yàn)方法：本研究首先將沉默基因所用的shRNA序列插入到含GFP的質(zhì)粒載體pGCsi-H1中,構(gòu)建pGCsi-H1-shRNA和pGCsi-Hl-control(對(duì)照)兩種質(zhì)粒載體。然后采用MTS細(xì)胞增殖檢測(cè)法分析輻射劑量(2Gy、4Gy、8Gy、12Gy)條件下處理Hep-2細(xì)胞后細(xì)胞的增殖情況以及沉默Survivin基因后,輻射劑量(2Gy、4Gy、8Gy、12Gy)條件下處理Hep-2細(xì)胞24h、48h、72h后細(xì)胞輻射敏感性的改變以及細(xì)胞增殖的情況；接著,采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)沉默Survivin基因后,8Gy輻射劑量條件下處理Hep-2細(xì)胞24h后細(xì)胞周期分布以及細(xì)胞凋亡的變化情況；最后檢測(cè)8Gy輻射劑量條件下沉默Survivin基因的荷瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)。比較試驗(yàn)各組腫瘤體積的大小。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：本研究結(jié)果顯示,Westemblot和qRT-PCR法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Survivin-shRNA轉(zhuǎn)染后能明顯減少人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞中survivin基因mRNA和蛋白的表達(dá)水平(P0.01); MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)輻射(2Gy、4Gy、8Gy、12Gy)條件下處理Hep-2細(xì)胞對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有抗增殖作用,并且呈現(xiàn)時(shí)間-劑量依賴性；沉默Survivin基因后,輻射(2Gy、4Gy、8Gy、12Gy)處理Hep-2細(xì)胞24h、48h、72h后,沉默Survivin基因組相對(duì)于對(duì)照組喉鱗狀細(xì)胞癌的細(xì)胞生存率明顯降低(P0.05)；流式細(xì)胞技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)輻射(8Gy)處理Hep-2細(xì)胞24h后,Survivin基因沉默組抑制了輻射誘導(dǎo)的G2期細(xì)胞阻滯(P0.01),增加了G1期細(xì)胞比例(P0.05)。輻射和Survivin基因沉默均誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡,但Survivin基因沉默與輻射協(xié)同會(huì)誘導(dǎo)更大程度的凋亡(P0.01)。裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)輻射(8Gy)處理荷瘤小鼠(Hep-2細(xì)胞移植瘤)24h后,沉默Survivin基因小鼠組的腫瘤生長(zhǎng)程度較空白組明顯受到抑制(P0.01)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論：1)輻射處理對(duì)喉鱗狀細(xì)胞癌的細(xì)胞生長(zhǎng)有抗增殖作用,并且呈現(xiàn)時(shí)間-劑量依賴性；2)沉默Survivin基因具有提高喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞輻射敏感性的作用,輻射處理?xiàng)l件下,沉默Survivin基因組相對(duì)于對(duì)照組喉鱗狀細(xì)胞癌的細(xì)胞生存率明顯降低；3)Survivin基因沉默組抑制了輻射誘導(dǎo)的G2期細(xì)胞阻滯(P0.01),增加了G1期細(xì)胞比例(P0.05)。輻射和Survivin基因沉默均誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡,但Survivin基因沉默與輻射協(xié)同誘導(dǎo)更大程度的凋亡(P0.01)。4)輻射處理?xiàng)l件下,沉默Survivin基因荷瘤小鼠組的腫瘤生長(zhǎng)程度較對(duì)照組明顯受到抑制。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.65

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本文編號(hào)：1700252