本文選題：喉鱗狀細胞癌　切入點：生存素基因　出處：《武漢大學》2015年博士論文

【摘要】：背景：喉鱗狀細胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma, LSCC),占所有癌癥的1.5%以及喉癌的絕大部分(約96%),是頭頸部最常見的惡性腫瘤之一,近年來,喉鱗狀細胞癌的發(fā)病率正在逐漸增加。放療在喉癌的治療中起著重要作用,特別是對早期階段,這被認為是有效的治療方式。早期的喉癌患者通常能夠通過手術或放療治愈,但是,進展期不能手術的晚期喉癌病人與預后不良有關。此外,盡管包括手術治療、放療和化療在內(nèi)的診斷和治療策略有所進展,但是在過去三十年里,喉鱗狀細胞癌的臨床治療結果尚未明顯改善,這很大程度與腫瘤的復發(fā)、轉移以及抗放化療敏感性有關。生存素(Survivin)基因位于人類染色體17q25,由單一基因編碼(距離端粒的位置約為3%),是凋亡抑制蛋白(IAP)家族中最小的成員,相對分子質(zhì)量為16.5 kDo Survivin抑制線粒體凋亡途徑的功能是通過其單一的重復(BIR)域完成的。但是由于Survivin在細胞周期中的G2/M期表達,支持細胞的快速分裂,許多學者認為,Survivin基因的主要功能在于控制細胞分裂,而不是抑制細胞凋亡。此外,除了睪丸,胸腺和胎盤外,Survivin通常在大多數(shù)正常成人組織表達水平極低。但在胎兒發(fā)育過程中,以及包括喉癌在內(nèi)的多數(shù)腫瘤中,生存素廣泛表達。近年來的研究發(fā)現(xiàn),Survivin與腫瘤細胞的凋亡密切相關,但是,Survivin在喉鱗狀細胞癌的放療治療中的相關作用未見報道,通過研究Survivin在喉鱗狀細胞中的作用機制,可以為臨床研究打下堅實的基礎。實驗目的：本實驗旨在探討沉默Survivin基因和輻射處理聯(lián)合使用對喉鱗狀細胞癌細胞系的增殖和凋亡的影響,以挖掘Survivin在喉鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展中可能扮演的角色,為喉鱗狀細胞癌的治療、防治提供新的策略。實驗方法：本研究首先將沉默基因所用的shRNA序列插入到含GFP的質(zhì)粒載體pGCsi-H1中,構建pGCsi-H1-shRNA和pGCsi-Hl-control(對照)兩種質(zhì)粒載體。然后采用MTS細胞增殖檢測法分析輻射劑量(2Gy、4Gy、8Gy、12Gy)條件下處理Hep-2細胞后細胞的增殖情況以及沉默Survivin基因后,輻射劑量(2Gy、4Gy、8Gy、12Gy)條件下處理Hep-2細胞24h、48h、72h后細胞輻射敏感性的改變以及細胞增殖的情況；接著,采用流式細胞技術檢測沉默Survivin基因后,8Gy輻射劑量條件下處理Hep-2細胞24h后細胞周期分布以及細胞凋亡的變化情況；最后檢測8Gy輻射劑量條件下沉默Survivin基因的荷瘤小鼠的腫瘤生長。比較試驗各組腫瘤體積的大小。實驗結果：本研究結果顯示,Westemblot和qRT-PCR法檢測發(fā)現(xiàn)Survivin-shRNA轉染后能明顯減少人喉鱗狀細胞癌Hep-2細胞中survivin基因mRNA和蛋白的表達水平(P0.01); MTS細胞增殖實驗檢測發(fā)現(xiàn)輻射(2Gy、4Gy、8Gy、12Gy)條件下處理Hep-2細胞對細胞生長有抗增殖作用,并且呈現(xiàn)時間-劑量依賴性；沉默Survivin基因后,輻射(2Gy、4Gy、8Gy、12Gy)處理Hep-2細胞24h、48h、72h后,沉默Survivin基因組相對于對照組喉鱗狀細胞癌的細胞生存率明顯降低(P0.05)；流式細胞技術分析發(fā)現(xiàn)輻射(8Gy)處理Hep-2細胞24h后,Survivin基因沉默組抑制了輻射誘導的G2期細胞阻滯(P0.01),增加了G1期細胞比例(P0.05)。輻射和Survivin基因沉默均誘導了細胞凋亡,但Survivin基因沉默與輻射協(xié)同會誘導更大程度的凋亡(P0.01)。裸鼠成瘤實驗發(fā)現(xiàn)輻射(8Gy)處理荷瘤小鼠(Hep-2細胞移植瘤)24h后,沉默Survivin基因小鼠組的腫瘤生長程度較空白組明顯受到抑制(P0.01)。實驗結論：1)輻射處理對喉鱗狀細胞癌的細胞生長有抗增殖作用,并且呈現(xiàn)時間-劑量依賴性；2)沉默Survivin基因具有提高喉鱗狀細胞癌細胞輻射敏感性的作用,輻射處理條件下,沉默Survivin基因組相對于對照組喉鱗狀細胞癌的細胞生存率明顯降低；3)Survivin基因沉默組抑制了輻射誘導的G2期細胞阻滯(P0.01),增加了G1期細胞比例(P0.05)。輻射和Survivin基因沉默均誘導了細胞凋亡,但Survivin基因沉默與輻射協(xié)同誘導更大程度的凋亡(P0.01)。4)輻射處理條件下,沉默Survivin基因荷瘤小鼠組的腫瘤生長程度較對照組明顯受到抑制。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.65

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本文編號：1700252