本文選題：長(zhǎng)鏈非編碼RNA　切入點(diǎn)：HNF1A-AS　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的:鼻咽癌是我國(guó)一種常見的頭頸部腫瘤之一,起病隱匿,大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)較晚,預(yù)后不好。對(duì)鼻咽癌的治療以放療為主,盡管在治療手段上有一定的進(jìn)展,但是對(duì)于患者5年生存率來(lái)說(shuō),并沒有顯著提高。至今,鼻咽癌的發(fā)病機(jī)制仍然不夠明確。長(zhǎng)鏈非編碼RNA對(duì)于生命活動(dòng)具有重要的調(diào)節(jié)功能,我們主要研究長(zhǎng)鏈非編碼RNA HNF1A-AS與鼻咽癌之間存在什么樣的關(guān)系。研究HNF1A-AS在鼻咽癌中的表達(dá)變化,證明HNF1A-AS具有促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的作用,并進(jìn)一步研究鼻咽癌細(xì)胞獲得遷移和侵襲能力與HNF1A-AS的關(guān)聯(lián)。方法:首先,取20例鼻咽癌患者的腫瘤組織作為實(shí)驗(yàn)組,取其鄰近的正常組織作為對(duì)照組,我們通過(guò)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(q RT-PCR)來(lái)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中HNF1A-AS的含量。在人體組織中得出結(jié)果后進(jìn)而在細(xì)胞水平進(jìn)一步研究。培養(yǎng)鼻咽癌細(xì)胞系5-8F,6-10B,HONE-1,CNE-2,SUNE-1和C666-2作為實(shí)驗(yàn)組,人鼻咽上皮細(xì)胞NP69作為非癌性細(xì)胞對(duì)照組,進(jìn)行q RT-PCR實(shí)驗(yàn),在細(xì)胞水平證明HNF1A-AS在癌細(xì)胞和對(duì)照組中的表達(dá)變化。選取變化最大的兩種細(xì)胞系CNE-2,SUNE-1進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。設(shè)計(jì)靶向干擾HNF1A-AS序列的si RNA作為實(shí)驗(yàn)組,選取RNA干擾實(shí)驗(yàn)常用的陰性對(duì)照序列作為對(duì)照組(scrambled si RNA)。我們將攜帶了HNF1A-AS-si RNA(以及scrambled si RNA)的慢病毒載體進(jìn)行包裝、純化,并進(jìn)行了病毒滴度測(cè)定。將攜帶了HNF1A-AS-si RNA(以及scrambled si RNA)的慢病毒載體轉(zhuǎn)染到CNE-2,SUNE-1細(xì)胞中。進(jìn)行q RT-PCR實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)染成功后的細(xì)胞株中HNF1A-AS的表達(dá)變化。再繼續(xù)將對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行HNF1A-AS功能研究的實(shí)驗(yàn)。通過(guò)細(xì)胞增殖能力(MTT)、克隆形成能力實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)來(lái)研究HNF1A-AS對(duì)細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響,再通過(guò)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步研究HNF1A-AS在細(xì)胞增殖中的作用。將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的鼻咽癌細(xì)胞株接種到24只雄性小鼠,每周測(cè)量一次腫瘤體積,來(lái)研究HNF1A-AS對(duì)體外成瘤能力的影響。最后,通過(guò)免疫印跡分析來(lái)研究HNF1A-AS介導(dǎo)細(xì)胞遷移的可能作用機(jī)制。結(jié)果:腫瘤組織中的HNF1A-AS m RNA水平明顯高于鄰近非癌性組織,與對(duì)照組相比,鼻咽癌組織中HNF1A-AS平均水平高于非癌性組織3倍以上,P0.001。HNF1A-AS在鼻咽癌細(xì)胞系中均表達(dá)上調(diào),在SUNE-1,CNE-2細(xì)胞中含量最高,HNF1A-AS在SUNE-1細(xì)胞中的水平增加了8倍,而在CNE-2細(xì)胞中表達(dá)更高,增加了9.2倍,p0.05(5-8F,HONE-1);P0.01(6-10B,CNE-2,SUNE-1,C666-1)。用攜帶并能穩(wěn)定表達(dá)scrambled和特異性HNF1A-AS si RNA的慢病毒載體轉(zhuǎn)染至CNE-2,SUNE-1細(xì)胞。熒光顯微鏡提示轉(zhuǎn)染效率70%。q RT-PCR結(jié)果顯示CNE-2,SUNE-1細(xì)胞中HNF1A-AS m RNA水平顯著下降。在CNE-2細(xì)胞中,與對(duì)照組相比,HNF1A-AS-si RNA組的HNF1A-AS水平降低了76%,在SUNE-1細(xì)胞中HNF1A-AS的水平降低到14%,p0.01(CNE-2),p0.001(SUNE-1)。細(xì)胞增殖和克隆形成能力:MTT結(jié)果顯示,第四天時(shí)CNE-2細(xì)胞的增殖速率降低了32.5%,而SUNE-1細(xì)胞在第三天時(shí)增殖速率降低了33.3%。HNF1A-AS干擾后增殖速率減慢�？寺⌒纬蓪�(shí)驗(yàn)顯示HNF1A-AS-si RNA組能抑制CNE-2,SUNE-1細(xì)胞系克隆形成。量化結(jié)果顯示,在CNE-2細(xì)胞中,在scrambled si RNA(對(duì)照組)處理組中,約形成了70個(gè)集落,而在特異性si RNA處理組的中僅觀察到21個(gè)集落;同樣,在SUNE-1細(xì)胞中,在scrambled si RNA處理組中,約形成了60個(gè)集落,而在特異性si RNA處理組的中僅觀察到19個(gè)集落,p0.01(CEN-2,SUNE-1)。細(xì)胞劃痕和細(xì)胞遷移侵襲能力實(shí)驗(yàn):HNF1A-AS被干擾后,CNE-2,SUNE-1細(xì)胞的遷移能力受到抑制。在CNE-2細(xì)胞中,scrambled組長(zhǎng)滿了劃痕面積的67%,而HNF1A-AS-si RNA組僅長(zhǎng)了44%;在SUNE-1細(xì)胞中,scrambled對(duì)照組長(zhǎng)滿了劃痕面積的51%,而HNF1A-AS-si RNA組僅長(zhǎng)了25%,p0.01(CEN-2,SUNE-1)。transwell定量實(shí)驗(yàn)顯示,CNE-2細(xì)胞遷移到下室的數(shù)量降低了66.7%,SUNE-1細(xì)胞遷移到下室的數(shù)量降低了62.5%。侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,CEN-2,SUNE-1兩種細(xì)胞的遷移數(shù)量與對(duì)照組相比分別降低了69.6%,62.5%,p0.01(CEN-2,SUNE-1)。細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn):在CNE-2細(xì)胞中,HNF1A-AS干擾使G0/G1期細(xì)胞數(shù)量增加了1.5倍左右,但卻使S期和G2/M期的細(xì)胞數(shù)量分別降低了65%和66.7%。同樣,HNF1A-AS-si RNA處理組的SUNE-1細(xì)胞中超過(guò)25.7%的S期和G2/M期細(xì)胞轉(zhuǎn)移至G0/G1期,p0.01(CEN-2,SUNE-1)。鼻咽癌模型小鼠實(shí)驗(yàn):我們每周對(duì)小鼠腫瘤體積進(jìn)行測(cè)量,發(fā)現(xiàn)從第三周起HNF1A-AS-si RNA和對(duì)照組的腫瘤體積存在很大的差別,注射CNE-2細(xì)胞的小鼠腫瘤體積在第三周和第四周分別降低了58.8%和64%;相似的結(jié)果在注射SUNE-1細(xì)胞的小鼠中也有體現(xiàn),與對(duì)照組相比,HNF1A-AS-si RNA的腫瘤體積在第三周和第四周分別降低了54%和69.7%,p0.05(CEN-2,SUNE-1)。免疫印跡分析:CNE-2,SUNE-1細(xì)胞中,HNF1A-AS干擾使上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的標(biāo)志性信號(hào)因子Cd C25C,cyclin B1,Snail,N-cadherin,vimentin表達(dá)明顯受到抑制,E-cadherin表達(dá)增加。結(jié)論:HNF1A-AS在鼻咽癌組織及細(xì)胞系中均過(guò)表達(dá)。HNF1A-AS干擾可抑制細(xì)胞增殖和克隆形成還能抑制細(xì)胞遷移與侵襲。HNF1A-AS干擾可引起鼻咽癌細(xì)胞周期停滯在G0/G1期。HNF1A-AS干擾抑制鼻咽癌模型鼠的腫瘤生長(zhǎng)。HNF1A-AS敲干擾可逆轉(zhuǎn)EMT過(guò)程。綜上所述,長(zhǎng)鏈非編碼RNA HNF1A-AS與鼻咽癌細(xì)胞增殖,遷移和侵襲密切相關(guān),其引起細(xì)胞遷移和侵襲的作用的機(jī)制可能是參與到了EMT過(guò)程有關(guān)。這就提示我們通過(guò)對(duì)長(zhǎng)鏈非編碼RNA HNF1A-AS進(jìn)一步的研究來(lái)為鼻咽癌的診斷和治療提供新的方向。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

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10 胡巧英;劉鵬;王磊;付真富;;Ⅲ、Ⅳ a期鼻咽癌患者放療同期化療加輔助化療的療效[J];癌癥;2007年04期

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本文編號(hào)：1695333