本文選題：RNF8　切入點(diǎn)：DNA損傷修復(fù)　出處：《蘭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:RNF8是一種泛素連接酶E3,在DNA損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用,參與細(xì)胞凋亡、衰老、突變反應(yīng)和神經(jīng)退行性變,腫瘤的發(fā)生。本研究通過(guò)觀察不同月齡RNF8基因敲除型(KO)與野生型(WT)小鼠之間耳蝸毛細(xì)胞、血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量、密度、厚度、損傷定位等變化,探討RNF8在DNA損傷修復(fù)中的作用及RNF8缺失后小鼠耳蝸主要結(jié)構(gòu)的老化機(jī)制,為老年性耳聾病理和治療提供依據(jù)。另對(duì)小鼠耳蝸取材和包埋技術(shù)進(jìn)行了改良。方法:通過(guò)配對(duì)繁殖獲取基因敲除小鼠和同窩野生對(duì)照。至8周齡、16周齡,32周齡分組。用小鼠耳蝸取材和包埋改良技術(shù)進(jìn)行組織切片,HE、CV染色觀察耳蝸毛細(xì)胞、血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞細(xì)胞密度、數(shù)量、厚度的變化;免疫熒光γ-H2AX染色;免疫組化8-oHdG標(biāo)記DNA損傷的程度及表達(dá)量;脂褐素、β-半乳糖苷酶染色檢測(cè)受損細(xì)胞衰老。結(jié)果:1.小鼠耳蝸改良取材技術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)間提高72.4%,完好率提高41.4%。切片完好率37.2%。2.HE、CV染色發(fā)現(xiàn),同齡KO組比WT組毛細(xì)胞改變明顯。血管紋三層出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)量減少,空泡,分離、斷裂。螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺失明顯,嚴(yán)重裂隙。3.耳蝸增齡性變化發(fā)現(xiàn),RNF8 KO小鼠耳蝸毛細(xì)胞、血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)增齡性改變更加明顯,免疫熒光γ-H2AX染色顯示損傷的細(xì)胞H2AX磷酸化反應(yīng)。4.小鼠耳蝸老化改變,KO組β-半乳糖苷酶染色發(fā)現(xiàn)血管紋隨增齡性改變32周齡為著,脂褐素染色發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核周圍棕褐色淡染。(P0.05)結(jié)論:改良快速小鼠耳蝸取材和切片包埋技術(shù)方法簡(jiǎn)便易行,成本低廉,節(jié)約資源,值得推廣。RNF8缺失是導(dǎo)致小鼠耳蝸形態(tài)學(xué)方面改變的重要原因之一,也間接影響著耳蝸生理功能,隨著年齡增加而愈加明顯。RNF8對(duì)小鼠耳蝸各主要結(jié)構(gòu)老化影響的差異化與老年性耳聾臨床各表現(xiàn)型存在著密切關(guān)聯(lián),RNF8缺失加速小鼠耳蝸的老化。RNF8缺失對(duì)小鼠耳蝸組織的修復(fù)功能機(jī)制具有重要影響。RNF8基因缺陷小鼠耳蝸的凋亡和衰老密切相關(guān)。
[Abstract]:Objective: RNF8 is a ubiquitin ligase E3, which plays an important role in the repair of DNA damage and plays an important role in apoptosis, senescence, mutation reaction and neurodegenerative changes. In this study, the morphology, number, density, thickness and injury location of cochlear hair cells, stria vascularis and spiral ganglion cells were observed between RNF8 knockout type and wild type WT-mice at different ages. To explore the role of RNF8 in the repair of DNA damage and the aging mechanism of the main cochlear structures in mice after RNF8 deletion. In addition, the cochlea sampling and embedding techniques of mice were improved. Methods: gene knockout mice and the same nest wild control were obtained by paired propagation. The cochlea hair cells were observed by histopathological staining and HECV staining with the modified technique of mouse cochlea sampling and embedding. Changes of cell density, number and thickness of stria vascularis and spiral ganglion cells; immunofluorescence 緯 -H2AX staining; the degree and expression of DNA damage labeled with 8-oHdG immunohistochemical staining; Lipofuscin and 尾 -galactosidase staining were used to detect the aging of damaged cells. The changes of hair cells in the same age KO group were more obvious than those in WT group. The number of hair cells in the three layers of stria vascularis was decreased, vacuole, dissociation and rupture. The loss of spiral ganglion cells was obvious, and the serious fissure was 3.The cochlear hair cells of RNF8KO mice were found to be in the age change of cochlea. The age-related changes of stria vascularis and spiral ganglia were more obvious, and immunofluorescence 緯 -H2AX staining showed that the injured cells were phosphorylated by H2AX. 4. 尾 -galactosidase staining of mouse cochlea aging group showed that the stria vascularis changed with the age of 32 weeks. Lipofuscin staining showed that the method of rapid cochlear sampling and embedding was simple and easy, low cost and resource saving. The loss of .RNF8 is one of the important reasons for the morphological changes in mouse cochlea and indirectly affects the physiological function of the cochlea. The difference of aging effect of RNF8 on the main structure of mouse cochlea and clinical manifestations of presbycusis are closely related with age. RNF8 deletion accelerates cochlea aging in mice. RNF8 deletion affects cochlear group in mice. The mechanism of tissue repair has an important effect on cochlea apoptosis and senescence in mice with RNF8 gene deficiency.
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R764.436

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1686338