本文選題：糖基化　切入點(diǎn)：角膜膠原交聯(lián)　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的 通過(guò)離體和在體動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)研究,采用不同濃度的甘油醛溶液、葡萄糖溶液對(duì)大鼠角膜進(jìn)行糖基化交聯(lián),應(yīng)用簡(jiǎn)便的讀字法定性評(píng)估角膜交聯(lián)后透明度的改變、微材料力學(xué)測(cè)試系統(tǒng)定量檢測(cè)角膜生物力學(xué)特性的變化、形態(tài)學(xué)觀(guān)察角膜膠原纖維的改變,旨在評(píng)估糖基化交聯(lián)對(duì)大鼠角膜生物力學(xué)特性的影響,為藥物控制圓錐角膜等角膜擴(kuò)張性病變的研究提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 材料與方法 1.選用2-3月齡清潔級(jí)Sprague-Dawley (SD)大鼠15只,無(wú)任何眼病,雌雄不限。隨機(jī)分為三組,每組5只,脫臼處死大鼠,分別取出雙眼角膜片,浸泡入相應(yīng)溶液中,Ⅰ組甘油醛濃度為0.005mol/L,Ⅱ組甘油醛濃度為0.050mol/L,Ⅲ組為對(duì)照組(不含甘油醛的基礎(chǔ)液)；右眼作為實(shí)驗(yàn)眼,左眼作為對(duì)照眼,連續(xù)浸泡4天后取出角膜片,進(jìn)行大鼠角膜的透明度改變、生物力學(xué)條帶單向拉伸試驗(yàn)比較極限應(yīng)力σ max (MPa)、極限應(yīng)變?chǔ)?max (%)、6%彈性模量E (MPa)以及組織形態(tài)學(xué)檢查。 2.選用SD大鼠25只,隨機(jī)分為五組,A組甘油醛濃度為0.005mol/L, B組甘油醛濃度為0.050mol/L, C組葡萄糖濃度為0.5%,D組葡萄糖濃度為5.0%,E組為對(duì)照組,給予生理鹽水滴眼,每組5只；右眼作為實(shí)驗(yàn)眼,左眼作為對(duì)照眼,每隔12小時(shí)滴眼一次,連續(xù)7天。7天后處死大鼠,進(jìn)行大鼠角膜的透明度、生物力學(xué)條帶試驗(yàn)比較極限應(yīng)力σ max (MPa),極限應(yīng)變?chǔ)?max(%),6%彈性模量E(MPa)以及組織形態(tài)學(xué)檢查。 結(jié)果 1.離體實(shí)驗(yàn)研究,浸泡前,三組均可以清楚地看到角膜片后的文字,且清晰度無(wú)明顯差異。浸泡后,Ⅰ組角膜片可透見(jiàn)文字,但較浸泡前模糊：Ⅱ組角膜片呈橙黃色,質(zhì)硬,無(wú)法完全平鋪于光面印刷紙上，清晰度較差；Ⅲ組角膜片讀字后的效果與浸泡前無(wú)明顯差異。 2.甘油醛溶液浸泡后的角膜條帶生物力學(xué)特性的變化：不同濃度甘油醛組與對(duì)照組實(shí)驗(yàn)眼角膜的應(yīng)力-應(yīng)變曲線(xiàn)有明顯的梯度變化。Ⅲ組實(shí)驗(yàn)眼角膜的極限應(yīng)力σ max、極限應(yīng)變?chǔ)舖ax、6%彈性模量E分別為2.198±0.457MPa.37.260%±8.407%和3.303±0.684MPa。甘油醛交聯(lián)組中,6%彈性模量E1、Ⅱ組分別為11.028±1.944MPa(P=0.001)和20.156±4.707MPa(P=0.000),較Ⅲ組分別增加了233.88%和510.23%。Ⅰ、Ⅱ組極限應(yīng)力σ max分別為7.986±1.723MPa(P=0.001)(?)12.251±3.203MPa(P=0.000),較Ⅲ組分別增加了263.33%和457.37%；Ⅰ、Ⅱ組極限應(yīng)變?chǔ)?max分別為32.600%±2.076%(P=0.196)和126.340%±3.433%　(P=0.007),較Ⅲ組分別降低12.51%和29.31%。三組間對(duì)照眼角膜的極限應(yīng)力σ max、極限應(yīng)變?chǔ)?max、6%彈性模量E無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3.不同濃度的甘油醛溶液浸泡大鼠角膜片后,角膜膠原纖維密度明顯增加,纖維間隙變小,且這種改變有濃度依賴(lài),內(nèi)皮層完整。Ⅱ組高濃度甘油醛溶液浸泡的大鼠離體角膜膠原纖維排列緊密,為較粗的團(tuán)塊狀；而Ⅲ組角膜組織切片顯示膠原纖維密度低,膠原纖維直徑小,纖維間的空隙較實(shí)驗(yàn)組大。 4.在體實(shí)驗(yàn)研究,不同濃度甘油醛和葡萄糖滴藥組角膜與對(duì)照組角膜均可以清楚地看到角膜片后的文字,透明度無(wú)明顯差異。 5.五組大鼠滴眼后角膜條帶的生物力學(xué)特性對(duì)比：不同濃度甘汕醛交聯(lián)與對(duì)照組實(shí)驗(yàn)眼的應(yīng)力-應(yīng)變曲線(xiàn)有明顯的梯度變化；而葡萄糖交聯(lián)應(yīng)力-應(yīng)變曲線(xiàn)變化小，，且總體差別變化不大。E組實(shí)驗(yàn)眼角膜極限應(yīng)力σ max、極限應(yīng)變?chǔ)?max.6%彈性模量E分別為2.053±0.853MPa.43.867％±1.890%和3.252±1.717MPa.A.B.C.D四組大鼠實(shí)驗(yàn)眼角膜極限應(yīng)力omax分別為6.043±2.084MPa (P=0.067).10.759±3.337MPa(P=0.000)、2.101±0.463MPa (P=1.000).2.373±0.569MPa(P=0.998),較E組分別增加了194.35%、424.06%、2.33%和15.59%；極限應(yīng)變?chǔ)?max分別為36.567%±3.089(P=0.267).28.533%±1.890%(P=0.009).34.800%±8.139%(P=0.090)和34.320%±4.329%(P=0.072),較E組分別降低了16.64%、34.97%、20.67%和21.77%；6%彈性模量E分別為7.718±1.076MPa(P=0.014).14.102±4.011MPa(P=0.000).3.927±0.314MPa(P=0.961).5.492±0.659MPa(P=0.314),較E組分別增加了137.33%、333.64%、20.76%和68.88%。五組間對(duì)照眼角膜的極限應(yīng)力σ max、極限應(yīng)變?chǔ)?max、6%彈性模量E無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 6.五組大鼠角膜組織形態(tài)學(xué)觀(guān)察,E組角膜組織切片膠原纖維密度低,纖維間的空隙較滴藥組大；甘油醛滴藥組中,A、B兩組角膜膠原纖維密度明顯增加,纖維間隙變小,上皮層及內(nèi)皮層均完整,甘油醛濃度越大,改變?cè)酱?但分別較離體實(shí)驗(yàn)中相同濃度的Ⅰ、Ⅱ組角膜纖維間隙大；葡萄糖滴藥組中C、D兩組角膜組織切片表現(xiàn)相似,膠原纖維密度變化不大,纖維間隙較E組略減小,但D組角膜上皮出現(xiàn)水腫。 結(jié)論 1、濃度為0.005mol/L和0.050mol/L勺甘油醛溶液浸泡離體大鼠角膜4天后,低濃度組角膜透明度輕度降低,高濃度組角膜透明度明顯降低并可看到角膜質(zhì)黃、變硬；濃度為0.005mol/L和0.050mol/L的甘油醛,0.5%和5.0%葡萄糖分別對(duì)大鼠角膜滴眼7天后,所產(chǎn)生的角膜透明度改變不明顯。糖基化交聯(lián)影響角膜的透明度與藥物濃度、藥物作用時(shí)間及作用方式相關(guān)。 2、甘油醛、葡萄糖等還原劑均可以通過(guò)糖基化作用交聯(lián)角膜膠原,產(chǎn)生“凍結(jié)’作用,增強(qiáng)角膜生物力學(xué)強(qiáng)度,這種改變與交聯(lián)劑濃度、作用時(shí)間及作用方式有關(guān)；甘油醛與葡糖糖的交聯(lián)能力不同,可能與各自的丌鏈結(jié)構(gòu)所占的比例及碳鏈的長(zhǎng)短不同有關(guān)。 3、結(jié)合圓錐角膜的典型病理改變及糖基化交聯(lián)后角膜膠原的變化,包括膠原纖維束的直徑、排列方式的改變,糖基化交聯(lián)可作為圓錐角膜等角膜擴(kuò)張疾病的一種新的治療手段,該療法費(fèi)用低廉、操作簡(jiǎn)單,對(duì)于角膜供體材料缺乏的國(guó)家,具有重要的臨床意義。但此方法還不夠完善,其遠(yuǎn)期療效及可能存在的副作用尚需進(jìn)一步的研究。
[Abstract]:objective
In vitro and in vivo animal studies, using glyceraldehyde solutions of different concentrations on rat corneal glycosylation and crosslinking of glucose solution, word reading legal application of a simple assessment of corneal transparency after crosslinking changes, changes in the micro mechanics of materials testing system for quantitative detection of corneal biomechanical properties and morphological observation of corneal collagen fiber the change was to assess the effect of glycosylation crosslinking on the biomechanical properties of the cornea of rats, provide experimental data for study of drug control of keratoconus and other corneal expansion diseases.
Materials and methods
The 1. clean grade Sprague-Dawley at the age of 2-3 months (SD) 15 rats, without any disease, male and female were randomly divided into three groups, 5 rats in each group. The rats were sacrificed, respectively, remove the eyes cornea, soak into the corresponding solution in group I, glyceraldehyde concentration is 0.005mol/L, group II L-glyceraldehyde concentration 0.050mol/L, III group was the control group (basic liquid free Glyceraldehydes); right eye as the experimental eye and the left eye as control eyes, continuous for 4 days out of the rat cornea, corneal biomechanical changes, Strip Tensile test comparison of ultimate stress of max (MPa), limit strain max (%), 6% E (MPa) and the elastic modulus of the morphological examination.
2. selected 25 SD rats were randomly divided into five groups, A group for the 0.005mol/L concentration of glyceraldehyde, glyceraldehyde concentration of B group was 0.050mol/L, the concentration of glucose in C group was 0.5%, the concentration of glucose was 5% in D group, E group, saline eye drops, 5 rats in each group; the right eye as the experimental eye and the left eye as control eyes, eye drops once every 12 hours, 7 days.7 days after the rats were sacrificed by rat corneal transparency, biomechanical comparison test strip limit stress max (MPa), limit strain max (%), 6% E (MPa) and the elastic modulus of the morphological examination.
Result
1.紱諱綋瀹為獙鐮旂┒,嫻告場(chǎng)鍓

本文編號(hào)：1677244