本文選題：NMDA受體亞基1　切入點(diǎn)：雙極細(xì)胞　出處：《武漢大學(xué)》2012年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：研究離子型谷氨酸受體NMDA (N-methyl-D-aspartate)受體的功能性亞基1(NMDAR1,NR1)蛋白在大鼠視網(wǎng)膜上的表達(dá)分布情況。 方法：采用western blot技術(shù)對(duì)大鼠視網(wǎng)膜組織勻漿行免疫印跡,驗(yàn)證所用抗NR1抗體的特異性。用免疫組化熒光單標(biāo)技術(shù),在SD大鼠視網(wǎng)膜垂直冰凍切片上研究NR1蛋白在大鼠視網(wǎng)膜上的大致分布,又使用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)研究其在視網(wǎng)膜雙極細(xì)胞(bipolar cell, BC)、無長(zhǎng)突細(xì)胞(amacrine cell, AC)及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(ganglion cell, GC)上的表達(dá)分布。 結(jié)果：western blot分析結(jié)果顯示本實(shí)驗(yàn)所用NR1抗體有較好的特異性。免疫熒光單標(biāo)法結(jié)果顯示NR1亞基的免疫陽(yáng)性產(chǎn)物彌散分布在大鼠視網(wǎng)膜的外網(wǎng)層(outer plexiform layer, OPL)和內(nèi)網(wǎng)層(inner plexiform layer, IPL)全層,且內(nèi)核層(inner nuclear layer, INL)及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(ganglion cell layer, GCL)的不同種類細(xì)胞均有NR1蛋白的分布,但外核層(outer nuclear layer, ONL)沒有觀察到明顯的NR1的陽(yáng)性反應(yīng)。進(jìn)一步采用細(xì)胞特異性標(biāo)記物和NR1抗體免疫雙標(biāo),顯示CHX10陽(yáng)性的雙極細(xì)胞胞體、PKCa陽(yáng)性的視桿信號(hào)主導(dǎo)和視錐信號(hào)主導(dǎo)的ON型雙極細(xì)胞(rod-dominant bipolar cell, RBC; cone-domidant ON type bipolar cell, ON-CBC)、recoverin陽(yáng)性的ON-CBC和視錐信號(hào)主導(dǎo)的OFF型雙極細(xì)胞(cone-dominant OFF type bipolar cell, OFF-CBC)和NR1均有共表達(dá)。我們觀察到膽堿能、多巴胺能、γ-氨基丁酸能和甘氨酸能的無長(zhǎng)突細(xì)胞均和NR1有共表達(dá)。用于標(biāo)記神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的特異性標(biāo)記物Bm3a陽(yáng)性的細(xì)胞也有NR1蛋白的表達(dá)。 結(jié)論：NMDA受體參與了外層及內(nèi)層視網(wǎng)膜的信息傳遞。研究提供了NR1亞基參與ON型和OFF型雙極細(xì)胞兩條通路的證據(jù),有力支持了NMDA受體在視網(wǎng)膜信號(hào)傳導(dǎo)通路中的調(diào)節(jié)作用。NR1蛋白在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的表達(dá)則表明NMDA受體也很可能參與青光眼或視網(wǎng)膜缺血性疾病中興奮毒性導(dǎo)致的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡。 目的：研究離子型谷氨酸受體NMDA受體的調(diào)節(jié)性亞基3A和3B(NMDAR3A-NMDAR3B, NR3A-NR3B)蛋白在鯽魚視網(wǎng)膜上的表達(dá)分布情況。 方法：采用western blot技術(shù)對(duì)鯽魚視網(wǎng)膜組織勻漿行免疫印跡,驗(yàn)證所用抗NR3A和抗NR3B抗體的特異性。用免疫組化熒光單標(biāo)及共聚焦激光掃描顯微技術(shù),在鯽魚視網(wǎng)膜垂直冰凍切片上研究NR3A和NR3B蛋白在鯽魚視網(wǎng)膜特別是外層視網(wǎng)膜上的表達(dá)分布。 結(jié)果：western blot分析結(jié)果顯示本實(shí)驗(yàn)所用抗NR3A和抗NR3B抗體分別較特異性地標(biāo)記鯽魚視網(wǎng)膜中的NR3A和NR3B蛋白。免疫熒光法結(jié)果顯示NR3A的免疫陽(yáng)性產(chǎn)物彌散分布在鯽魚視網(wǎng)膜的外網(wǎng)層,呈點(diǎn)狀或彌散狀分布在內(nèi)網(wǎng)層,內(nèi)核層及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層的不同種類細(xì)胞均有NR3A蛋白的分布。重點(diǎn)可見外核層細(xì)胞胞體、軸突和軸突終末上有NR3A的強(qiáng)陽(yáng)性免疫反應(yīng)。NR3B的免疫陽(yáng)性產(chǎn)物彌散性分布在OPL和IPL,亦分布在INL和GCL少許細(xì)胞上,但陽(yáng)性信號(hào)均比較弱。重點(diǎn)可見ONL只有部分光感受器細(xì)胞的胞體和軸突有較強(qiáng)的免疫陽(yáng)性反應(yīng)。 結(jié)論：NR3A和NR3B蛋白的廣泛表達(dá)進(jìn)一步表明NMDA參與外層及內(nèi)層視網(wǎng)膜的信息傳遞。NR3亞基在光感受器細(xì)胞的表達(dá)表明其可能參與年齡相關(guān)性黃斑變性和遺傳性視網(wǎng)膜退行性疾病發(fā)病過程中興奮毒性導(dǎo)致的光感受器細(xì)胞凋亡,其在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層的表達(dá)則表明NR3亞基也可能參與青光眼或視網(wǎng)膜缺血性疾病中興奮毒性導(dǎo)致的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Objective: To study the ionotropic glutamate receptor NMDA (N-methyl-D-aspartate) receptor functional subunit 1 (NMDAR1, NR1) protein expression in the rat retina distribution.
Methods: rat retina tissue homogenate by Western blotting using Western blot technology, the specificity of anti NR1 antibodies for validation. Immunohistochemical single labeled fluorescence technique in rat retina SD vertical frozen sections of the general distribution of NR1 protein in the rat retina, and using double immunofluorescence analysis the retinal bipolar cells (bipolar cell, BC), amacrine cells (amacrine, cell, AC) and ganglion cells (ganglion cell, GC) on the expression of the distribution.
Results: Western blot analysis showed that the experiment uses NR1 antibody has good specificity. Immunofluorescence single standard method showed that NR1 subunit immunoreactive products dispersed in the outer plexiform layer of rat retina (outer plexiform, layer, OPL) and the inner plexiform layer (inner plexiform layer, IPL) layer, and the kernel layer (inner nuclear layer, INL) and ganglion cell layer (ganglion cell layer, GCL) distribution of different types of cells were NR1 protein, but the outer nuclear layer (outer nuclear layer, ONL) observed no obvious NR1 positive reaction. The cell specific marker NR1 antibody and immunohistochemical staining showed. CHX10 positive bipolar cells, ON bipolar cells and rod signal leading cone signals as the dominant positive PKCa (rod-dominant bipolar cell cone-domidant ON type bipolar, RBC; cell, ON-CBC), recoverin + ON -CBC and cone signals leading OFF type bipolar cells (cone-dominant OFF type bipolar cell, OFF-CBC) and NR1 were co expression. We observed cholinergic, dopaminergic and GABAergic and glycinergic amacrine cells and NR1 were co expressed in ganglion cells. Marker specific marker Bm3a positive cells also expressed NR1 protein.
Conclusion: the NMDA receptors in the outer layer and the inner layer of the retina. The transmission of information provides the NR1 subunit in ON type and OFF type bipolar cells two pathways of evidence research, the strong support of the NMDA receptor in retinal signal transduction pathways in the regulation of.NR1 protein expression in ganglion cells showed that NMDA receptor is likely to participate in ganglion cell apoptosis induced glaucoma or retinal excited ischemic diseases.
Objective: To study the ionotropic glutamate receptor NMDA receptor regulatory subunit 3A and 3B (NMDAR3A-NMDAR3B, NR3A-NR3B) protein expression in the carp retina on the distribution.
Methods: the retinal tissue homogenate by Western blot using western carp blot technology, specific anti NR3A and anti NR3B antibodies for validation. Immunohistochemical single labeled fluorescence and confocal laser scanning microscopy, in the carp retina vertical freezing sections of NR3A and NR3B protein in the carp retina especially the expression and distribution of the outer layer on the retina.
Results: Western blot analysis showed that the anti NR3A and anti NR3B antibodies were specific markers in the carp retina NR3A and NR3B protein. Immunofluorescence assay showed that the immune positive products distributed in the outer plexiform layer of carp retinal NR3A, spotty or dispersion distribution in the inner plexiform layer, kernel distribution layer and ganglion cell layer in different cell types of NR3A protein. The visible outer nuclear layer cells, the strong immunoreactivity of.NR3B axons and axon terminal of NR3A immunoreactive products diffuse distribution in OPL and IPL, INL and GCL also distributed in a cell, but the positive signals were compared weak. ONL visible only part of photoreceptor cells in cell bodies and axons have strong immunoreactivity.
Conclusion: the expression of NR3A and NR3B protein are further suggested the involvement of NMDA in the outer and inner retinal information transfer.NR3 subunit expression in photoreceptor cells showed that it may be involved in age-related macular degeneration and hereditary retinal degenerative diseases in the pathogenesis of excited photoreceptor apoptosis toxicity caused by its expression in ganglion cell layer showed that the NR3 subunit may also be involved in ganglion cell apoptosis induced glaucoma or retinal excited ischemic diseases.

【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R774.1

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本文編號(hào)：1632842