本文選題：內(nèi)耳　切入點(diǎn)：中耳　出處：《吉林大學(xué)》2015年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：Scleraxis（SCX）是一個(gè)堿性螺旋環(huán)螺旋（basic helix-loop-helix, bLHL）轉(zhuǎn)錄因子，它在肌腱和韌帶的祖細(xì)胞以及這些韌帶的分化細(xì)胞中表達(dá)。本課題組在SCX轉(zhuǎn)基因報(bào)告鼠的18.5天的胚胎中檢測(cè)到SCX基因在耳蝸的齒間細(xì)胞（Interdentalcell）、聽(tīng)毛細(xì)胞和支持細(xì)胞中表達(dá)。為了進(jìn)一步了解SCX基因在內(nèi)耳的功能，對(duì)SCX-null小鼠進(jìn)行了聽(tīng)覺(jué)腦干誘發(fā)電位檢查，發(fā)現(xiàn)有50%的基因缺陷鼠聽(tīng)閾升高。然而SCX-null小鼠在耳蝸形態(tài)及細(xì)胞模式上沒(méi)有異常。通過(guò)進(jìn)一步測(cè)試發(fā)現(xiàn)所有的聽(tīng)閾提高都伴隨著中耳感染。脊椎動(dòng)物的中耳傳遞振動(dòng)至骨膜，砧骨和鐙骨肌通過(guò)不同的肌腱插入錘骨和鐙骨以調(diào)節(jié)中耳的肌肉反射。這個(gè)反射是中耳保護(hù)機(jī)制的主要部分。目前為止還沒(méi)有對(duì)這些韌帶發(fā)育及功能的報(bào)道。在胚胎第14.5天時(shí)SCX在韌帶祖細(xì)胞開(kāi)始表達(dá)，在胚胎16.5到18.5天時(shí)分化成鐙骨肌和砧骨肌的肌腱。由于SCX基因缺失，肌腱祖細(xì)胞在發(fā)育過(guò)程中無(wú)法伸長(zhǎng)導(dǎo)致SCX-null小鼠的鐙骨和砧骨肌腱明顯變短。SCX-GFP轉(zhuǎn)基因小鼠首次描述了中耳韌帶由開(kāi)始形成至成熟的整個(gè)過(guò)程。SCX-null是第一個(gè)從基因水平導(dǎo)致中耳韌帶分化異常的小鼠模型，這個(gè)模型將會(huì)有利于中耳韌帶和肌肉的形成和功能的研究。 哺乳動(dòng)物的內(nèi)耳是控制聽(tīng)覺(jué)和平衡的特殊感覺(jué)器官。耳蝸及前庭感覺(jué)上皮包含機(jī)械敏感的毛細(xì)胞和相關(guān)的支持細(xì)胞。毛細(xì)胞和/或他們支配的神經(jīng)元的損傷是引起聽(tīng)力損失和平衡功能障礙的最頻繁因素。對(duì)于哺乳動(dòng)物內(nèi)耳分子分布及細(xì)胞命運(yùn)等方面的進(jìn)一步了解將有助于基因和細(xì)胞治療的發(fā)展。這包括細(xì)胞譜系和細(xì)胞跨邊界遷移分析（如感覺(jué)區(qū)域與非感覺(jué)區(qū)域）。本研究的目的是利用逆轉(zhuǎn)錄病毒對(duì)胚胎11.5天(E11.5)小鼠耳部聽(tīng)囊進(jìn)行譜系分析。復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒編碼人類(lèi)堿性磷酸酶（PLAP）和可變的24bp寡核苷酸標(biāo)記被微量注射入E11.5小鼠聽(tīng)囊。從產(chǎn)后內(nèi)耳切片挑取PLAP陽(yáng)性細(xì)胞并進(jìn)行嵌套PCR。共享相同的序列標(biāo)記的PLAP陽(yáng)性細(xì)胞被認(rèn)為來(lái)源于共同的祖細(xì)胞。在耳蝸和前庭感覺(jué)上皮、神經(jīng)節(jié)、螺旋緣和血管紋共檢測(cè)了三十五多細(xì)胞克隆，每個(gè)克隆平均有3.4個(gè)細(xì)胞。前庭的毛細(xì)胞，支持細(xì)胞和壺腹的非感覺(jué)上皮細(xì)胞相關(guān)聯(lián)。耳蝸的外毛細(xì)胞與其相鄰的支持細(xì)胞相關(guān)聯(lián)。相比之下，螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元、齒間細(xì)胞和Claudius’細(xì)胞均與同類(lèi)型細(xì)胞相關(guān)聯(lián)，這些克隆分散距離高達(dá)幾百微米。這些數(shù)據(jù)為哺乳動(dòng)物內(nèi)耳祖細(xì)胞發(fā)育的研究作出了貢獻(xiàn)。 氯胺酮結(jié)合美托咪定（medetomidine，MK）或右美托咪（dexmedetomidine，DK）作為全身麻醉藥物被廣泛用于實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物。本實(shí)驗(yàn)研究的主要目的是評(píng)估MK或DK的使用對(duì)胚胎發(fā)育，尤其是內(nèi)耳發(fā)育的影響。25妊娠小鼠被隨機(jī)分為5組，在胚胎8.5日齡時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)組母鼠進(jìn)行腹腔內(nèi)注射或皮下注射氯胺酮與MK或DK的混合溶液。正常飼養(yǎng)至母鼠分娩，統(tǒng)計(jì)出生后的幼鼠個(gè)數(shù)，以及幼鼠在出生后第0天，第15天和第30天的體重。耳功能檢測(cè)分為兩個(gè)部分:聽(tīng)力水平和平衡能力的檢測(cè)。聽(tīng)力水平檢測(cè)采用聽(tīng)性腦干反應(yīng)測(cè)試（ABR），該測(cè)試應(yīng)用于檢查耳蝸的發(fā)育和功能；前庭平衡功能的檢測(cè)采用接觸反射和游泳測(cè)試。結(jié)果表明，不同的注射方式，即腹腔注射和皮下注射對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒(méi)有顯著影響（P0.05）。MK和DK不同的處理組之間也沒(méi)有明顯的差異（P0.05）。另外氯胺酮聯(lián)合MK和DK的處理組與正常對(duì)照組在胚胎發(fā)育和耳朵功能方面均未發(fā)現(xiàn)明顯差異。所有的幼鼠體重正常生長(zhǎng)。處理組的ABR閾值與對(duì)照組差異不明顯（P0.05）。藥物處理后的幼鼠能夠表現(xiàn)出正常的接觸反射和游泳的行為，，并且免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示顯示在所有六個(gè)內(nèi)耳感覺(jué)區(qū)形態(tài)正常。總之，這項(xiàng)研究并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)氯胺酮結(jié)合美托咪定或右美托咪對(duì)一般的胚胎發(fā)育和后代耳功能產(chǎn)生任何影響。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R764

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1599172