本文選題：SHISA3　切入點(diǎn)：啟動(dòng)區(qū)甲基化　出處：《寧波大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的喉癌(Laryngeal cancer)是頭頸部最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,近年來(lái)喉癌的發(fā)病率呈現(xiàn)上升的趨勢(shì),和其它腫瘤一樣,喉癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多階段、多步驟,涉及遺傳、表觀遺傳和環(huán)境暴露等多因素影響的復(fù)雜過(guò)程。DNA甲基化作為表觀遺傳最主要的組成部分,已被證實(shí)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。SHISA3是最新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)候選抑癌基因,已有報(bào)道其在肺癌和結(jié)直腸癌中可通過(guò)啟動(dòng)子區(qū)高甲基化引起基因表達(dá)沉默,從而參與腫瘤發(fā)生發(fā)展。但SHISA3在喉癌發(fā)生發(fā)展中的作用尚不清楚。因此,本研究探討SHISA3基因啟動(dòng)子甲基化與喉癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性,評(píng)價(jià)其作為喉癌診斷及預(yù)后分子標(biāo)志物的潛在價(jià)值。方法1.用MEPRESS在線分析網(wǎng)站(http://mexpress.be/)分析The Cancer Genome Atlas(TCGA)數(shù)據(jù)庫(kù)中頭頸部鱗癌中SHISA3基因的甲基化及表達(dá)情況。2.經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),收集93對(duì)喉癌患者的癌組織及癌旁正常組織,整理臨床病理資料。3.甲基化特異性PCR法(Methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)檢測(cè)93對(duì)喉癌患者的癌組織及癌旁正常組織中SHISA3基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)。4.熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測(cè)35對(duì)喉癌組織和癌旁組織中SHISA3 mRNA表達(dá)水平。5.應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)MSP檢測(cè)的SHISA3基因甲基化片段是否具有調(diào)節(jié)基因表達(dá)的功能。6.卡方檢驗(yàn)和Fisher確切概率法用于SHISA3啟動(dòng)子甲基化的比較及與臨床資料的相關(guān)性的分析。采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組間SHISA3基因表達(dá)水平的比較。繪制受試者工作曲線(the receiver operating characteristic,ROC)曲線并計(jì)算曲線下面積(the area under the curve,AUC)評(píng)價(jià)SHISA3甲基化對(duì)喉癌的診斷價(jià)應(yīng)用值。Log-rank檢驗(yàn)和多元Cox風(fēng)險(xiǎn)比例模型評(píng)價(jià)SHISA3甲基化對(duì)喉癌預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。結(jié)果1.通過(guò)MEXPRESS對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中頭頸部鱗癌標(biāo)本的分析,發(fā)現(xiàn)SHISA3基因啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化水平在癌組織顯著升高,并且與其表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。2.MSP結(jié)果表明喉癌組織中SHISA3基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化率顯著高于癌旁正常組織(P=4.58E-12)。3.進(jìn)一步分析喉癌患者的臨床數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)SHISA3基因甲基化狀態(tài)與低分化(P=0.02)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.03)、臨床晚期(P=0.02)和高T分級(jí)(P0.05)等臨床資料密切相關(guān)。4.q RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SHISA3基因在35例喉癌組織中的表達(dá)水平較癌旁正常組織顯著下調(diào)(P=3.84E-05),且甲基化的喉癌患者中SHISA3基因的表達(dá)水平顯著低于未發(fā)生甲基化的喉癌患者(P=1.67E-03)。5.雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn),插入的被MSP檢測(cè)的SHISA3啟動(dòng)子區(qū)域片段具有增強(qiáng)下游基因表達(dá)的功能(P0.05)。6.構(gòu)建ROC曲線,曲線下面積為0.91(P0.01)。構(gòu)建生存曲線,Log-rank檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SHISA3基因甲基化組的生存率顯著差于未甲基化組病人(P=0.024)。采用多元Cox風(fēng)險(xiǎn)比例模型對(duì)年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度和臨床分期進(jìn)行校正,甲基化組的喉癌病人較未甲基化組的病人的死亡風(fēng)險(xiǎn)比為2.71,可信區(qū)間為1.024 7.177(P=0.047)。結(jié)論SHISA3基因啟動(dòng)子區(qū)高甲基化可通過(guò)抑制其基因表達(dá)在喉癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程發(fā)揮重要作用,可能是喉癌診斷及評(píng)判預(yù)后的一個(gè)潛在分子標(biāo)志物。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1562195