發(fā)布時間：2018-02-28 20:40

  本文關(guān)鍵詞： 年齡相關(guān)性黃斑變性 貝伐單抗 活性氧 人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞　出處：《眼科新進(jìn)展》2017年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的觀察貝伐單抗對人視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細(xì)胞抗氧化功能的影響,以探討抗新生血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)制劑治療年齡相關(guān)性黃斑變性后黃斑部萎縮的可能機(jī)制。方法用含終濃度0.25g·L~(-1)貝伐單抗的DMED/F12培養(yǎng)液培養(yǎng)人RPE細(xì)胞系A(chǔ)RPE-19細(xì)胞,根據(jù)處理時間的不同分為0 h組(對照組)、12 h組、24 h組、48 h組、72 h組共5組,加入H2O2誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)。用CCK-8法檢測細(xì)胞活性,MitoSox Red熒光染色檢測細(xì)胞內(nèi)線粒體活性氧(reactive oxygen species,ROS)產(chǎn)生水平,JC-1熒光染色檢測細(xì)胞線粒體膜電位的變化;分別用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及免疫蛋白印跡法(Western blot)檢測各組促氧化因子NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)和抗氧化因子血紅素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA和蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果CCK-8檢測結(jié)果顯示:上述處理對細(xì)胞活性無顯著影響,0 h組、12 h組、24 h組、48h組和72 h組細(xì)胞活性分別為(100.2±3.3)%、(99.2±2.7)%、(102.5±6.4)%、(103.9±3.7)%和(103.6±3.3)%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與對照組相比,12 h、24 h、48 h、72 h組細(xì)胞內(nèi)ROS水平上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);線粒體膜電位在12 h、24 h、48 h、72 h組均較對照組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),48 h達(dá)最低,72 h時顯著提高,但仍低于對照組。RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示:與對照組比較,NOX4 mRNA和蛋白的表達(dá)在12 h、24 h、48 h和72 h組均上升,而且在24 h表達(dá)最高,之后明顯下降,但仍高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與對照組比較,HO-1 mRNA的表達(dá)在24 h、48 h和72 h組均下降,而HO-1蛋白的表達(dá)在48 h和72 h組下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論臨床濃度的貝伐單抗可以降低RPE的抗氧化功能,可能是長期抗VEGF治療后黃斑部進(jìn)行性萎縮的原因之一。
[Abstract]:Objective to observe the effect of bevacizumab on the antioxidant function of human retinal pigment epithelium (RPE) cells. To explore the possible mechanism of anti vascular endothelial growth factor (VEGF) vascular endothelial growth factor (VEGF) preparation in the treatment of macular atrophy after age-related macular degeneration. Methods Human RPE cell line ARPE-19 cells were cultured with DMED/F12 medium containing 0.25g 路L ~ (-1) final concentration bevacizumab. According to the time of treatment, 5 groups were divided into 0 h group (control group, 12 h group, 24 h group, 48 h group, 72 h group). Oxidative stress was induced by H _ 2O _ 2.MitoSox Red fluorescence staining was used to detect the mitochondrial reactive oxygen species (Ros) production level and JC-1 fluorescence staining to detect the change of mitochondrial membrane potential. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blotting were used to detect the mRNA and protein expression of NADPH oxidase 4 (NADPH oxidase 4NOX4) and heme oxygenase-1 (HO-1HO-1) in each group. Results the results of CCK-8 were significant. The results showed that there was no significant difference in cell activity between 0 h group and 12 h group and 24 h group and 72 h group were 100.2 鹵3.3 h and 99.2 鹵2.7%, respectively. There was no significant difference between the two groups (103.9 鹵3.7% and 103.6 鹵3.3%), and the level of ROS was increased compared with the control group. The mitochondrial membrane potential decreased at 12 h, 24 h, 48 h and 72 h compared with the control group, and the difference was statistically significant at 48 h and the lowest at 72 h, and the mitochondrial membrane potential was significantly higher than that in the control group at 48 h. However, the results of RT-PCR and Western blot showed that the expression of nox4 mRNA and protein increased at 12 h, 24 h and 72 h, and reached the highest level at 24 h, then decreased significantly, but still higher than that in control group. Compared with the control group, the expression of HO-1 mRNA decreased at 24 h and 72 h, while the expression of HO-1 protein decreased at 48 h and 72 h. Conclusion the clinical concentration of bevacizumab can reduce the antioxidant function of RPE, which may be one of the causes of macular progressive atrophy after long-term anti VEGF therapy.
【作者單位】： 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院、山東省眼科研究所青島眼科醫(yī)院;山東省眼科研究所山東省眼科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;山東省眼科研究所青島眼科醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(編號:81670828) 山東省自然科學(xué)基金資助(編號:ZR2014HM029)~~
【分類號】：R774.5

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7 路慧s，

本文編號：1548855