本文關(guān)鍵詞： 長(zhǎng)鏈非編碼RNA 血管生成 神經(jīng)退行性病變 反應(yīng)性神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:血管和神經(jīng)系統(tǒng)雖然在功能上有所不同,但它們通常具有類(lèi)似的功能維護(hù)機(jī)制以及相同的調(diào)控因子。神經(jīng)血管功能紊亂已成為一些血管性疾病和神經(jīng)性疾病的發(fā)病機(jī)制。本研究旨在闡明長(zhǎng)鏈非編碼RNA-MIAT(long non-coding RNA-MIAT)在眼部神經(jīng)血管功能異常進(jìn)程的調(diào)控作用及其機(jī)制。方法:我們首先通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)了 MIAT在視網(wǎng)膜血管病變和神經(jīng)病變動(dòng)物模型以及視網(wǎng)膜血管細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞病變中的表達(dá)規(guī)律,明確了眼部血管神經(jīng)病變與MIAT表達(dá)的相關(guān)性;在體水平,采用視網(wǎng)膜血管發(fā)育、角膜新生血管(CNV)以及糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)等動(dòng)物模型,通過(guò)視網(wǎng)膜平鋪片IB4染色、裂隙燈顯微鏡和免疫熒光染色等技術(shù),揭示了 MIAT干預(yù)對(duì)眼部神經(jīng)血管功能異常的調(diào)控作用;離體水平,采用Hoechst染色、JC-1染色和PI/Calcein-AM染色等技術(shù),揭示了 MIAT表達(dá)干預(yù)對(duì)視網(wǎng)膜細(xì)胞活力、增殖、凋亡和細(xì)胞相互作用的影響;機(jī)制研究方面,采用熒光素酶和qRT-PCR等實(shí)驗(yàn),揭示了 MIAT調(diào)控Muller細(xì)胞功能的分子機(jī)制。結(jié)果:qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),MIAT在氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變(OIR)、視神經(jīng)夾傷(ONT)以及糖尿病的動(dòng)物模型中表達(dá)異常;MIAT在Miiller細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞以及神經(jīng)元的高氧或者低氧脅迫時(shí)表達(dá)異常,其中MIAT在Miiller細(xì)胞脅迫時(shí)表達(dá)改變最為明顯。在體實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),MIAT的表達(dá)沉默抑制了小鼠視網(wǎng)膜血管的發(fā)育,緩解了角膜堿燒傷小鼠角膜新生血管的形成,減少了糖尿病小鼠視網(wǎng)膜的膠質(zhì)化以及RGC的存活。離體實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),MIAT的表達(dá)沉默降低了 Miiller細(xì)胞和RGC的活性、線(xiàn)粒體膜電位以及增殖能力,促進(jìn)了凋亡;共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明,Miiller細(xì)胞的MIAT表達(dá)改變間接地影響視網(wǎng)膜神經(jīng)元和內(nèi)皮細(xì)胞的功能;機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),MIAT可通過(guò)MIAT/miR-150-5P/VEGF來(lái)調(diào)控Muller細(xì)胞的功能,從而調(diào)節(jié)眼部神經(jīng)血管間的相互作用。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)鏈非編碼RNA-MIAT是眼部血管病變和神經(jīng)病變共有的調(diào)控因子;MIAT可通過(guò)MIAT/miR-150-5P/VEGF信號(hào)通路調(diào)控視網(wǎng)膜細(xì)胞的功能。MIAT有望成為治療眼部神經(jīng)血管功能紊亂的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective: although blood vessels and nervous systems are functionally different. But they usually have similar functional maintenance mechanism and the same regulatory factors. Neurovascular dysfunction has become the pathogenesis of some vascular diseases and neuropathic diseases. This study aims to elucidate the long chain noncoding RN. A-MIATA. Long non-coding RNA-MIATA). Regulation of neurovascular dysfunction in the eye and its mechanism. Methods: we first detected the process of neurovascular dysfunction by qRT-PCR. Expression of MIAT in animal models of retinopathy and neuropathy as well as retinal vascular and neuronal lesions. The correlation between ocular vascular neuropathy and MIAT expression was clarified. Retinal vascular development, corneal neovascularization (CNV) and diabetic retinopathy (IB4) were used in vivo. Slit lamp microscopy and immunofluorescence staining revealed the regulatory effect of MIAT intervention on ocular neurovascular dysfunction. In vitro, Hoechst staining and PI/Calcein-AM staining were used to reveal the effect of MIAT expression on retinal cell viability and proliferation. The effects of apoptosis and cell interaction; In the aspect of mechanism study, luciferase and qRT-PCR experiments were used to reveal the molecular mechanism of MIAT regulating the function of Muller cells. The expression of MIAT was abnormal in oxygen-induced retinopathy, optic nerve injury and diabetic animal model. The expression of MIAT was abnormal in Miiller cells, endothelial cells, pericytes and neurons under hypoxia or hyperoxia stress. The expression of MIAT was the most obvious in Miiller cells under stress. In vivo, it was found that the silencing of the expression of MIAT inhibited the development of retinal blood vessels in mice. It alleviated corneal neovascularization in alkali burn mice, reduced retina glialization and RGC survival in diabetic mice. The silencing of MIAT expression decreased the activity of Miiller cells and RGC, mitochondrial membrane potential and proliferation ability, and promoted apoptosis. The results of co-culture showed that the expression of MIAT in Miiller cells indirectly affected the function of retinal neurons and endothelial cells. It was found that MIAT/miR-150-5P/VEGF can regulate the function of Muller cells. Conclusion: in this study, long chain noncoding RNA-MIAT is a common regulatory factor for ocular vascular lesions and neuropathy. MIAT can regulate the function of retinal cells through MIAT/miR-150-5P/VEGF signaling pathway. MIAT may be a new target for the treatment of ocular neurovascular dysfunction.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R77

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本文編號(hào)：1489698