本文關(guān)鍵詞： 順鉑 圓窗 耳蝸 CTR1 ATP7A ATP7B 耳蝸 硫酸銅 圓窗 順鉑 耳毒性　出處：《中南大學(xué)》2012年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 研究順鉑的不同給藥方法對大鼠耳蝸的功能和形態(tài)影響,探討建立順鉑耳聾動物模型的有效方法。 方法： Wistar雄性大鼠隨機分為三組,組Ⅰ為生理鹽水圓窗用藥組(6只),組Ⅱ為順鉑圓窗用藥組(6只),組Ⅲ為順鉑腹腔注射組(6只)。采用聽性腦干反應(yīng)、耳蝸中軸石蠟切片HE染色及基底膜蘇木素染色毛細胞計數(shù)技術(shù)來評估大鼠的功能和形態(tài)改變情況。 結(jié)果： 1.聽性腦干反應(yīng)檢測：組Ⅰ動物在用藥前后聽閾提高了1.66±4.08dB SPL,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),組Ⅱ與組Ⅲ動物用藥前后聽閾分別提高56.67±17.51dB SPL、41.67±14.72dB SPL,差異有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。組Ⅱ、組Ⅲ分別與組~比較,差異均有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。組Ⅱ與組Ⅲ比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。 2.耳蝸中軸切片HE染色：組Ⅰ動物Corti's器、螺旋神經(jīng)節(jié)、血管紋形態(tài)正常。組Ⅱ與組Ⅲ動物Corti's器皺縮,外毛細胞斷裂甚至缺失；螺旋神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目減少,細胞核變��；神經(jīng)纖維排列紊亂；血管紋結(jié)構(gòu)紊亂,細胞水腫樣變。 3.耳蝸基底膜鋪片及毛細胞計數(shù)：組Ⅰ毛細胞排列緊密、染色均勻、未見到內(nèi)、外毛細胞有明顯缺失。組Ⅱ外毛細胞缺失明顯,尤以第一排、第二排明顯,內(nèi)毛細胞排列整齊,僅見少量缺失。組Ⅲ以外毛細胞缺失為主,內(nèi)毛細胞基本保持完好。毛細胞計數(shù)顯示組Ⅰ內(nèi)、外毛細胞平均缺失率低,各回的外毛細胞平均缺失率與組Ⅱ、組Ⅲ比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。組Ⅱ與組Ⅲ的毛細胞缺失以底回的外毛細胞為主,中回次之,頂回?zé)o明顯的外毛細胞缺失,比較組Ⅱ與組Ⅲ各回外毛細胞的平均缺失率,差異不明顯,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。各組的內(nèi)毛細胞缺失率均較低。 結(jié)論： 1.開放聽泡從圓窗用藥的手術(shù)操作不會引起內(nèi)耳的形態(tài)學(xué)改變和功能的變化。 2.采用順鉑(1mg/ml)圓窗給藥的方法能夠成功建立順鉑耳毒性的大鼠模型,有操作方法簡單,致死率低,動物狀態(tài)好等優(yōu)點。 目的： 了解銅離子轉(zhuǎn)運蛋白家族中CTR1、ATP7A、ATP7B蛋白在大鼠順鉑耳毒性中的空間分布特點和表達量的改變；硫酸銅、順鉑圓窗給藥后對CTR1、ATP7A、ATP7B蛋白表達的影響,為探討順鉑耳毒性的防治提供理論基礎(chǔ)。 方法： Wistar雄性大鼠隨機分為4組,組Ⅰ正常對照組(非處理組,6只),組Ⅱ硫酸銅(0.02mg/kg)圓窗浸潤組(6只),組Ⅲ硫酸銅(0.04mg/kg)圓窗浸潤組(6只),組Ⅳ順鉑(1mg/ml)圓窗浸潤組(6只)。采用免疫組織化學(xué)技術(shù),對各組近中軸位耳蝸石蠟切片行CTR1、ATP7A、ATP7B蛋白的免疫組織化學(xué)染色,光學(xué)顯微鏡下觀察耳蝸組織中的表達情況。提取各組耳蝸組織總蛋白,應(yīng)用Western-blot技術(shù)檢測各組CTR1、ATP7A、ATP7B蛋白表達水平。提取耳蝸組織的總RNA,應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測各組CTR1mRNA、 ATP7A mRNA、ATP7B mRNA的表達水平。 結(jié)果： 1.免疫組化檢測CTR1、ATP7A、ATP7B蛋白的表達：正常對照組和實驗各組的耳蝸各回Corti's器、螺旋神經(jīng)節(jié)、血管紋的細胞質(zhì)和細胞膜上均檢測到了CTR1、ATP7A、ATP7B的表達。IPP6.0軟件分析其平均光密度值顯示CTR1的平均光密度值呈現(xiàn)降低趨勢,而ATP7A和ATP7B的平均光密度值呈現(xiàn)增高趨勢。 2.Western-blot技術(shù)檢測CTR1、ATP7A、ATP7B蛋白的表達：CTR1、ATP7A、ATP7B蛋白在各組的耳蝸組織均有明顯的表達,采用bandscan6.0對各個條帶進行光密度分析,結(jié)果用目的條帶與beta-actin條帶的光密度比值來表示。CTR1蛋白的光密度分析顯示各組分別為0.532±0.031、0.3944-0.024、0.234±0.030和0.191±0.015呈下降的趨勢,組與組之間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；ATP7A蛋白的光密度值分別為0.149±0.012、0.2744±0.026、0.420±0.030和0.515±0.021,呈上升的趨勢,組與組之間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。ATP7B蛋白的光密度值分別為0.146±0.013、0.273±0.027、0.423±0.027和0.513±0.053,呈上升的趨勢,組與組之間比較,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3.RT-PCR檢測CTR1mRNA、ATP7A mRNA、ATP7B mRNA的表達：CTR1mRNA、ATP7A mRNA、ATP7B mRNA在各組的耳蝸組織均有明顯的表達,采用bandscan6.0對各個條帶進行光密度分析,結(jié)果用目的條帶與beta-actin條帶的光密度比值來表示。CTR1mRNA的光密度分析顯示各組分別為0.508±0.035、0.391±0.022、0.240±0.023和0.186±0.021,呈下降的趨勢,組與組之間比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；ATP7A mRNA光密度分析顯示分別為0.148±0.012、0.262±0.025、0.423±0.029和0.510±0.056,呈上升的趨勢,組與組之間比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。ATP7B mRNA的光密度分析顯示0.144±0.013、0.267±0.023、0.416±0.019和0.509±0.059呈上升的趨勢,組與組之間比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 1.CTR1、ATP7A、ATP7B蛋白在各組的耳蝸Corti's器、螺旋神經(jīng)節(jié)、血管紋均有明顯的表達,提示CTR1、ATP7A、ATP7B蛋白參與了順鉑和銅離子在內(nèi)耳的轉(zhuǎn)運。 2.銅離子圓窗給藥能夠促進CTR1蛋白表達的下降和ATP7A和ATP7B蛋白的表達的升高,提示CTR1、ATP7A、ATP7B蛋白在內(nèi)耳細胞中發(fā)揮維持銅離子平衡的作用。 3.圓窗給藥建立的大鼠耳毒性模型中CTR1蛋白表達下降和ATP7A、ATP7B蛋白表達升高,提示內(nèi)耳細胞可能通過調(diào)節(jié)CTR1、ATP7A、ATP7B蛋白的表達量來減少順鉑的吸收,這可能是內(nèi)耳細胞拮抗順鉑耳毒性的一種自身反饋機制。 目的： 探討硫酸銅圓窗給藥對順鉑耳毒性的保護作用,為硫酸銅局部給藥治療順鉑耳毒性提供理論依據(jù)。 方法： Wistar雄性大鼠隨機分為三組,組Ⅰ生理鹽水圓窗浸潤30min+順鉑腹腔給藥20mg/kg(6只),組Ⅱ硫酸銅圓窗浸潤30min+順鉑腹腔給藥20mg/kg(6只),組Ⅲ硫酸銅圓窗浸潤4h+順鉑腹腔給藥20mg/kg(6只)。采用聽性腦干反應(yīng)、耳蝸中軸石蠟切片HE染色及基底膜蘇木素染色毛細胞計數(shù)技術(shù)評估硫酸銅對順鉑耳毒性的保護作用。 結(jié)果： 1.聽性腦干反應(yīng)檢測：組Ⅰ、組Ⅱ和組Ⅲ大鼠在順鉑腹腔給藥和耳部干預(yù)之后聽力閾值分別升高53.33±15.06、15.00±5.48和18.33+7.53。組Ⅰ與組Ⅱ、組Ⅰ與組Ⅲ之間聽閾的改變有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01),組Ⅱ與組Ⅲ之間聽閾的改變無明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 2.耳蝸中軸切片HE染色：組Ⅰ耳蝸毛細胞缺失明顯,結(jié)構(gòu)欠清晰,蓋膜消失；螺旋神經(jīng)節(jié)細胞水腫,細胞核變小,數(shù)目減少；神經(jīng)纖維排列紊亂；血管紋結(jié)構(gòu)紊亂。組Ⅱ耳蝸毛細胞結(jié)構(gòu)清晰,蓋膜完整；螺旋神經(jīng)節(jié)細胞排列緊密,細胞核大,細胞質(zhì)少；神經(jīng)纖維呈條索狀,分布均勻,排列整齊；血管紋形態(tài)正常,結(jié)構(gòu)清晰。組Ⅲ耳蝸毛細胞未見明顯的損害；螺旋神經(jīng)節(jié)細胞排列整齊,細胞核染色均勻；神經(jīng)纖維呈條索狀,分布均勻,排列整齊；血管紋形態(tài)正常,結(jié)構(gòu)清晰。 3.耳蝸基底膜鋪片及毛細胞計數(shù)顯示：組Ⅰ外毛細胞缺失明顯、排列紊亂。內(nèi)毛細胞完整,損害不明顯。組Ⅱ外毛細胞染色均勻、僅見少數(shù)細胞缺失；內(nèi)毛細胞排列整齊、染色均勻。組Ⅲ外毛細胞染色均勻、排列整齊、少數(shù)外毛細胞缺失；內(nèi)毛細胞排列整齊、染色均勻。毛細胞計數(shù)結(jié)果顯示,組Ⅰ外毛細胞損害較重,以底回為主,中回次之,頂回缺失較少,比較組Ⅰ與組Ⅱ,組Ⅰ與組Ⅲ的各回外毛細胞平均缺失率,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。比較組Ⅱ與組Ⅲ的各回的平均毛細胞缺失率,差異無明顯的統(tǒng)計學(xué)意義。各組內(nèi)毛細胞的缺失率均較低。 結(jié)論： 硫酸銅圓窗給藥能減輕順鉑對內(nèi)耳的形態(tài)和功能的影響,其機制可能是通過減少內(nèi)耳細胞對順鉑的攝取來發(fā)揮耳保護作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R764

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本文編號：1467623