發(fā)布時(shí)間：2018-01-22 11:36

  本文關(guān)鍵詞： 壓力 微環(huán)境 仿生培養(yǎng) 角膜內(nèi)皮細(xì)胞　出處：《眼科》2017年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的探討體外壓力仿生培養(yǎng)系統(tǒng)下不同梯度壓力對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)和功能的調(diào)控作用。設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)性研究。研究對(duì)象兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞。方法將體外培養(yǎng)的第一代兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞分為五組:A組為無(wú)壓力常規(guī)培養(yǎng)(空白對(duì)照),B組為正常壓力仿生培養(yǎng)(15 mmHg),C組為壓力波動(dòng)組,將壓力設(shè)為15mmHg、25 mmHg、20 mmHg、10 mmHg,D組30 mmHg壓力培養(yǎng),E組50 mmHg壓力培養(yǎng)。細(xì)胞均培養(yǎng)24h,免疫法鑒定原代角膜內(nèi)皮細(xì)胞,HE染色和電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的改變,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞活性。主要指標(biāo)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)、存活率。結(jié)果獲取的所有細(xì)胞證實(shí)為角膜內(nèi)皮細(xì)胞表型,無(wú)角膜上皮細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞污染。五組細(xì)胞分別培養(yǎng)24h后,經(jīng)HE染色和電鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)正常壓力微環(huán)境培養(yǎng)的角膜內(nèi)皮細(xì)胞排列緊密,六邊形細(xì)胞居多,細(xì)胞表面微絨毛豐富,細(xì)胞核染色質(zhì)豐富,而高壓力培養(yǎng)的角膜內(nèi)皮細(xì)胞活性差,細(xì)胞間隙加大。經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)分析顯示,正常壓力組、30 mmHg組、壓力波動(dòng)組、50 mmHg組的角膜內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)24 h后細(xì)胞存活率分別為(98.16±0.45)%、(78.83±1.65)%、(70.2±3.54)%、(41.33±0.25)%(P=0.016)。高壓力培養(yǎng)組中隨著壓力的升高和持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞活性顯著下降。結(jié)論正常壓力微環(huán)境培養(yǎng)對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)和功能具有正向調(diào)節(jié)作用,而高壓力對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞具有損傷性,并隨時(shí)間延長(zhǎng)而加重。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of different gradient pressure on the morphology and function of corneal endothelial cells in vitro under the pressure bionic culture system. To design an experimental study on rabbit corneal endothelial cells. Methods the first generation of cultured rabbit corneal endothelial cells in vitro was used to investigate the effects of different gradient pressures on the morphology and function of corneal endothelial cells. Rabbit corneal endothelial cells were divided into five groups:. Group A was cultured without stress (. Blank control). Group B was a normal pressure bionic culture group with 15 mm HgG and C group was a pressure fluctuation group. The pressure was set at 15mm HgG 25 mmHg + 20 mmHg for 10 mmHg. Group D was cultured under pressure for 30 mmHg and group E was cultured under pressure for 50 mmHg. All the cells were cultured for 24 hours. The primary corneal endothelial cells were identified by HE staining and the morphological changes were observed by electron microscope. Main outcome measures: morphology and survival rate of corneal endothelial cells. Results all the obtained cells were confirmed as corneal endothelial cell phenotypes. No corneal epithelial cells and stromal cells were contaminated. After cultured for 24 hours in the five groups, HE staining and electron microscopy showed that the corneal endothelial cells cultured under normal pressure microenvironment were closely arranged, and hexagonal cells were the majority. The microvilli on the surface of the cells were abundant, the nuclear chromatin was abundant, but the activity of corneal endothelial cells in high pressure culture was poor, and the intercellular gap was enlarged. Flow cytometry analysis showed that the normal pressure group was 30 mmHg group. The survival rate of corneal endothelial cells cultured for 24 hours in the pressure fluctuating group was 98.16 鹵0.45 and 78.83 鹵1.65% respectively. 70.2 鹵3.54 and 41.33 鹵0.25 respectively. In the high pressure culture group, the pressure increased and the duration prolonged with the increase of pressure. Conclusion normal pressure microenvironment culture can positively regulate the morphology and function of corneal endothelial cells, while high pressure can damage corneal endothelial cells and increase with time.
【作者單位】： 南昌大學(xué);江西新視界眼科醫(yī)院;中山眼科中心;南昌愛(ài)爾眼科;南昌大學(xué)附屬眼科醫(yī)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(30801263)
【分類號(hào)】：R772.2
【正文快照】： 近年干細(xì)胞領(lǐng)域的研究證實(shí),組織的微環(huán)境不同,導(dǎo)致組織干細(xì)胞的發(fā)育方向也不同,這提示細(xì)胞的微環(huán)境對(duì)其生理功能具有重要的調(diào)控作用[1]。Koizumi和Yuriko等[2-3]運(yùn)用氣-液相技術(shù),模擬活體角膜上皮細(xì)胞處于空氣和淚液交互作用形成的 氣-液面環(huán)境,培養(yǎng)的角膜上皮細(xì)胞連接更為緊

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本文編號(hào)：1454557