發(fā)布時(shí)間：2018-01-08 05:08

  本文關(guān)鍵詞：大鼠角膜緣干細(xì)胞分離培養(yǎng)及其橫向分化能力初探　出處：《局解手術(shù)學(xué)雜志》2016年04期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的體外分離培養(yǎng)大鼠角膜緣干細(xì)胞(LSCs),并探討在細(xì)胞因子EGF、b FGF聯(lián)合RA作用下,LSCs體外橫向分化為神經(jīng)干細(xì)胞樣細(xì)胞的能力。方法體外分離培養(yǎng)LSCs并進(jìn)行p63免疫組化鑒定。在原代培養(yǎng)的LSCs中,設(shè)立2個(gè)誘導(dǎo)組進(jìn)行分化實(shí)驗(yàn),誘導(dǎo)組1加入EGF(20 ng/mL)和b FGF(10 ng/mL),誘導(dǎo)組2加入EGF(20 ng/mL)、b FGF(10 ng/mL)和RA(25 ng/mL),同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照組。培養(yǎng)7 d后,收集各組細(xì)胞作神經(jīng)元標(biāo)志物Nestin的免疫組化檢測(cè)及陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù),收集各組細(xì)胞蛋白做蛋白免疫印跡分析各組Nestin蛋白表達(dá)情況,相關(guān)數(shù)據(jù)作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果免疫組化結(jié)果顯示,體外分離培養(yǎng)的LSCs p63呈陽(yáng)性,誘導(dǎo)分化的2組細(xì)胞Nestin呈陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性率分別為(77.01±6.32)%和(84.01±5.43)%,誘導(dǎo)組2的誘導(dǎo)率高于誘導(dǎo)組1,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);對(duì)照組細(xì)胞Nestin呈陰性表達(dá)。蛋白免疫印跡結(jié)果顯示,2個(gè)誘導(dǎo)組在240 k Da處可見(jiàn)Nestin蛋白條帶,誘導(dǎo)組2 Nestin蛋白表達(dá)略高于誘導(dǎo)組1,對(duì)照組未見(jiàn)Nestin蛋白條帶。結(jié)論成功分離培養(yǎng)大鼠LSCs,在細(xì)胞因子EGF、b FGF作用下,LSCs具有橫向分化為神經(jīng)干細(xì)胞樣細(xì)胞的能力,同時(shí)聯(lián)合使用RA有促進(jìn)LSCs向神經(jīng)干細(xì)胞樣細(xì)胞分化的作用。
[Abstract]:Objective to isolate and culture rat limbal stem cells (LSCS) in vitro, and to investigate the effect of EGFB FGF combined with RA. The ability of LSCs to differentiate into neural stem cell-like cells in vitro. Methods LSCs was isolated and cultured in vitro and p63 was identified by immunohistochemistry. Two induction groups were set up to conduct differentiation experiment. Induction group 1 added EGF(20 ng / mL) and b FGF(10 ngr mLL, induction group 2 added EGF(20 ngr mL). B FGF(10 ngr mLL) and RA(25 ngr mLL were set up at the same time blank control group was set up and cultured for 7 days. The expression of Nestin was detected by immunohistochemistry and the positive cells were counted by immunoblotting. The expression of Nestin protein in each group was analyzed by Western blotting. Results Immunohistochemical results showed that LSCs p63 was positive in vitro and Nestin was positive in differentiated cells. The positive rates were 77.01 鹵6.32% and 84.01 鹵5.43%, respectively. The induction rate in group 2 was higher than that in group 1 (P 0.05). The expression of Nestin in the control group was negative, and the Western blot showed that the Nestin protein bands were found in the two induction groups at 240kDa. The expression of 2 Nestin protein in the induced group was slightly higher than that in the induced group 1, and no band of Nestin protein was found in the control group. Conclusion the isolated and cultured rat LSCs were successfully isolated and cultured in the cytokine EGF. B FGF could differentiate into neural stem cell like cells in the transverse direction, and the combination of RA could promote the differentiation of LSCs into neural stem cell-like cells.
【作者單位】： 貴州醫(yī)科大學(xué)組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室;
【基金】：貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長(zhǎng)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(黔省專合字【2012】41號(hào)) 貴州省科技廳、貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院聯(lián)合基金(黔科合LG字【2012】026號(hào))
【分類號(hào)】：R772.2
【正文快照】： 角膜緣干細(xì)胞(limbal stem cells,LSCs)位于角膜緣上皮基底層,是一種成體干細(xì)胞,具有不斷增殖分化和向心性移動(dòng)的能力,能夠修復(fù)替代衰老死亡的角膜上皮細(xì)胞,是角膜上皮再生的源泉,在角膜上皮的更新和角膜疾病的治療中起著不可替代的作用[1]。角膜緣干細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞均來(lái)源于

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