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【摘要】：背景與目的:視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因1(retinoblastoma 1,RB1)能夠抑制多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,且與細(xì)胞周期、分化、衰老、凋亡及生長抑制等調(diào)控密切相關(guān)。該研究旨在明確miR-222是否通過靶向RB1表達(dá)而促進(jìn)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞的生長與侵襲,進(jìn)一步揭示miR-222促瘤作用的分子機(jī)制。方法:將miR-222(miR-222模擬物)+RB1-wt(野生型RB1的3’-非翻譯區(qū)的熒光素酶報告載體)、miR-NC(無關(guān)序列對照)+RB1-wt、miR-222+RB1-mut(突變型RB1的3’-非翻譯區(qū)的熒光素酶報告載體)及miR-NC+RB1-mut共轉(zhuǎn)染人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞株Y79,并采用單光子檢測熒光素酶活性。采用蛋白[質(zhì)]印跡法(Western blot)檢測RB1表達(dá)水平的改變。將miR-222與miR-NC、RB1(pc DNA3.1-RB1)與vector(pc DNA3.1)、miR-222+RB1及miR-NC+vector轉(zhuǎn)染Y79細(xì)胞,MTS檢測細(xì)胞生長增殖活性,Transwell侵襲實驗檢測Y79細(xì)胞生長與侵襲能力的影響。結(jié)果:與miR-NC+RB1-wt組比較,共轉(zhuǎn)染miR-222+RB1-wt組的熒光素酶活性強(qiáng)度降低了約56.67%(P0.05)。與miR-NC比較,miR-222組RB1蛋白水平顯著下調(diào)(P0.05)。轉(zhuǎn)染miR-222組細(xì)胞生長速度顯著高于miR-NC組(P0.05)。與pc DNA3.1組比,pc DNA3.1-RB1組可顯著抑制Y79細(xì)胞的生長(P0.05),而miR-222+pc DNA3.1-RB1組和miR-NC+pc DNA3.1組比較,細(xì)胞生長速度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。轉(zhuǎn)染miR-222組穿過基底膜的細(xì)胞數(shù)分別為(193±10),與對照組(144±11)比較能明顯加快Y79細(xì)胞的穿膜能力,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而miR-NC+pc DNA3.1組和miR-222+pc DNA3.1-RB1組比較,穿過基底膜的細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:miR-222通過靶向調(diào)控RB1表達(dá)而促進(jìn)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞的生長與侵襲。
【作者單位】： 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬十堰市太和醫(yī)院眼科中心;湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬十堰市太和醫(yī)院心胸外科;
【基金】：湖北省教育廳科學(xué)研究計劃指導(dǎo)性項目(B2015477) 十堰市科技課題(14Y40)
【分類號】：R739.7
【正文快照】： Micro RNAs(mi RNAs)是內(nèi)源性非編碼小分子RNA,其長度為19~25 bp,通過與m RNA的3’-UTR區(qū)域完全或者不完全配對,促進(jìn)m RNA的降解和(或)阻礙其翻譯,在轉(zhuǎn)錄后水平上對其表達(dá)進(jìn)行負(fù)調(diào)控,調(diào)控過程涉及到個體發(fā)育、細(xì)胞增殖與分化及凋亡多種生命活動[1]。mi RNA與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展

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