本文關(guān)鍵詞：mTOR信號通路在視乳頭部位活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞中的作用

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【摘要】：目的:本課題旨在探討視神經(jīng)乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞活化過程中m TOR信號通路的蛋白表達(dá),并進(jìn)一步探討雷帕霉素對m TOR信號通路下游相關(guān)蛋白的調(diào)節(jié)作用機(jī)制。方法:培養(yǎng)成年雄性SD大鼠視乳頭部位原代星形膠質(zhì)細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞純化以及GFAP鑒定后進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn),細(xì)胞生長至對數(shù)生長期,采用不同濃度表皮生長因子(EGF)刺激細(xì)胞,表皮生長因子的濃度:con,20ng/ml,40ng/ml,培養(yǎng)1小時(shí)后,進(jìn)行GFAP蛋白印跡檢測,觀察細(xì)胞的活性狀態(tài),及p-Akt、p-m TOR、p-S6K的蛋白表達(dá)情況,確定本實(shí)驗(yàn)的最佳濃度。然后采用10μM雷帕霉素(RAPA)預(yù)處理星形膠質(zhì)細(xì)胞,分為四組:正常對照組、EGF組、RAPA組、EGF+RAPA組,然后進(jìn)行p-Akt、p-m TOR、p-S6K的蛋白印跡法檢測蛋白表達(dá)量。結(jié)果:視神經(jīng)乳頭原代星形膠質(zhì)細(xì)胞免疫熒光染色GFAP鑒定達(dá)95%純度以上,然后用于本研究。不同濃度EGF刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞后,蛋白印跡法檢測結(jié)果表明EGF濃度為40ng/ml時(shí)GFAP的表達(dá)顯著升高,p-Akt在兩不同濃度EGF刺激時(shí)表達(dá)均上調(diào),且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p-m TOR、p-S6K的蛋白表達(dá)也上調(diào),但只在EGF濃度為40ng/ml時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。雷帕霉素預(yù)處理后,EGF+RAPA組的p-m TOR、p-S6K表達(dá)量和EGF組相比明顯下降,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異(p0.01),p-Akt表達(dá)與EGF組相比無明顯差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RAPA組與對照組相比p-m TOR、p-S6K表達(dá)量明顯下降,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01),p-Akt蛋白表達(dá)無明顯變化。結(jié)論:EGF誘導(dǎo)視神經(jīng)乳頭原代星形膠質(zhì)細(xì)胞活化過程中m TOR信號通路相關(guān)蛋白p-Akt、p-m TOR、p-S6K表達(dá)上調(diào),雷帕霉素(m TOR抑制劑)抑制EGF誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞p-m TOR、p-S6K的表達(dá),雷帕霉素可能通過m TOR通路抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞活化而參與青光眼視神經(jīng)保護(hù)。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R77

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