本文關(guān)鍵詞：大鼠PAX6基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的:構(gòu)建攜帶綠色熒光蛋白(GFP)報(bào)告基因及PAX6基因的重組真核表達(dá)載體,觀察其在人胚腎細(xì)胞(293FT)細(xì)胞中的表達(dá)。方法:采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)從大鼠腦組織中獲取PAX6基因,經(jīng)連接T載體測(cè)序驗(yàn)證正確后,與真核表達(dá)載體p EF1α-IRES-Ac GFP經(jīng)Sal I/Bam HI雙酶切后;經(jīng)T4 DNA連接酶連接,獲得重組質(zhì)粒p EF1α-PAX6-IRES-Ac GFP,用菌液PCR、Sal I/Bam HI雙酶切及測(cè)序鑒定正確后,用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞,采用倒置熒光顯微鏡觀察GFP的表達(dá)、蛋白印跡(Western blot)法檢測(cè)PAX6蛋白表達(dá)。結(jié)果:重組質(zhì)粒p EF1α-PAX6-IRES-Ac GFP經(jīng)RT-PCR和雙酶切均得到大小為1 269 bp的目的條帶,測(cè)序鑒定該序列與Gen Bank中大鼠PAX6基因序列的同源性達(dá)100%,插入基因的大小和方向正確;重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞后可見GFP綠色熒光,Western blot顯示PAX6蛋白表達(dá)。結(jié)論:成功構(gòu)建了PAX6真核表達(dá)重組質(zhì)粒p EF1α-PAX6-IRES-Ac GFP,能在293FT細(xì)胞中表達(dá)PAX6蛋白。
【作者單位】： 貴州醫(yī)科大學(xué)組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室;
【基金】：貴州省科技廳基金[黔科合J字(2015)2011號(hào)] 貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長(zhǎng)專項(xiàng)資金項(xiàng)目[黔省專合字(2012)41號(hào)]
【分類號(hào)】：R772.2
【正文快照】： 角膜盲是最重要的致盲眼病之一,全球約有超過1 000萬(wàn)的角膜盲患者,我國(guó)現(xiàn)有角膜盲患者約300多萬(wàn),每年新發(fā)的感染性角膜病致盲患者約10萬(wàn)人[1]。然而,角膜供體的極度匱乏,是造成角膜盲得不到及時(shí)治療的主要原因之一。位于角鞏膜交界處的角膜緣干細(xì)胞(limbal stem cells,LSCs)是

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 孫博;張文秀;吳芳春;馬月輝;沙偉;關(guān)偉軍;;胎牛視網(wǎng)膜干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年04期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張瀚;大鼠視網(wǎng)膜干細(xì)胞的培養(yǎng)及增殖和分化能力的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

2 張慧;體外誘導(dǎo)視網(wǎng)膜干細(xì)胞及間充質(zhì)干細(xì)胞向視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮細(xì)胞分化的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 黃海東;王明月;郭穎;管迪;李鴻甫;尹祿;;Pax6在翼狀胬肉上皮鱗狀化生中的表達(dá)及臨床意義[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2013年12期

2 韓海斌;楊建立;丁玉;溫子玉;;PAX6基因多態(tài)性與精神分裂癥的關(guān)系探討[J];山東醫(yī)藥;2014年12期

3 陸玉鳳;劉麗梅;;Pax6基因突變與胰腺發(fā)育和糖尿病發(fā)生關(guān)系的研究進(jìn)展[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年05期

4 劉衛(wèi)華;劉漪淪;劉海榮;羅永慧;徐金眉;;Pax6基因轉(zhuǎn)染對(duì)脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化研究[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2014年08期

5 楊珂;楊恬;姜自玲;;Pax6基因和蛋白在大鼠觸須毛囊中的表達(dá)[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年13期

6 ;[J];;年期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 孫霞;PAX6基因單核苷酸多態(tài)性與精神分裂癥的關(guān)聯(lián)性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1265178