視網(wǎng)膜新生血管形成中Cathepsin B和VEGF的相關(guān)性研究
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【摘要】:目的:建立小鼠氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變(oxygen-induced retinopathy,OIR)模型,觀察OIR模型鼠視網(wǎng)膜的Cathepsin B和VEGF的表達(dá)變化以及Cathepsin B-RNAi-Lentivirus對視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用,探討在小鼠視網(wǎng)膜新生血管形成中Cathepsin B和VEGF的關(guān)系。方法:44只7日齡(P7)的健康C57BL/6J小鼠隨機分為正常組、模型對照組、NC-GFP-Lv組和CB-RNAi-Lv組,共四組,每組11只,22眼。正常組的小鼠在自然狀態(tài)下生長,不進行干預(yù)。其余三組小鼠在P7時放于氧體積分?jǐn)?shù)為(75±2)%的密封氧箱內(nèi)飼養(yǎng),5天后(P12)出氧箱,繼續(xù)在自然環(huán)境中喂養(yǎng),以建立小鼠OIR模型;其中,模型對照組不予任何干預(yù),NC-GFP-Lv組和CB-RNAi-Lv組的小鼠在P13時分別給予玻璃體腔內(nèi)注射NC-GFP-Lentivirus和Cathepsin B-RNAi-Lentivirus各1μl。各組小鼠在P17時使用異硫氰酸葡聚醛熒光素行心臟灌注并對視網(wǎng)膜進行鋪片,用熒光顯微鏡觀察和對比各組視網(wǎng)膜血管的生成情況和分布改變;收集各組小鼠的視網(wǎng)膜,采取Real-time PCR技術(shù)測定各組視網(wǎng)膜中Cathepsin B和VEGF mRNA的表達(dá)量;用Western blot技術(shù)分別測定各組Cathepsin B和VEGF蛋白的表達(dá)量。結(jié)果:視網(wǎng)膜鋪片顯示:正常組小鼠視網(wǎng)膜血管走行正常、規(guī)則,無新生血管生成;模型對照組和NC-GFP-Lv組視網(wǎng)膜的血管有明顯分層和分支,毛細(xì)血管和血管吻合較多,可見新生血管扭曲,并且向深部走行;CB-RNAi-Lv組視網(wǎng)膜新生血管明顯減少,血管分層和分支相對不明顯,毛細(xì)血管數(shù)目相對降低。與正常組相比,模型對照組視網(wǎng)膜Cathepsin B和VEGF mRNA及蛋白的表達(dá)水平增高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。模型對照組視網(wǎng)膜的Cathepsin B和VEGF mRNA及蛋白的表達(dá)水平與NC-GFP-Lv組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與NC-GFP-Lv組相比,CB-RNAi-Lv組視網(wǎng)膜的Cathepsin B和VEGF mRNA及蛋白的表達(dá)水平降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)高氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管形成中Cathepsin B和VEGF高表達(dá)。(2)Cathepsin B-RNAi-Lentivirus可以抑制Cathepsin B和VEGF mRNA和蛋白的水平。(3)推斷VEGF表達(dá)的改變可能是受Cathepsin B表達(dá)的影響。
【學(xué)位授予單位】:山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:R774.1
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,本文編號:1255889
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