本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)染hTERT基因?qū)θ私悄?nèi)皮細胞增殖及功能維持的影響

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【摘要】：目的探索轉(zhuǎn)染人端粒酶催化亞單位(TERT)促進人角膜內(nèi)皮細胞(HCECs)增殖并進行長期培養(yǎng)的可行性。方法原代HCECs生長到80%融合時,采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將質(zhì)粒p EGFP-N1和p BABE-puroh TERT轉(zhuǎn)染到HCECs,1μg/m L嘌呤霉素篩選。RT-PCR和Western blot檢測嘌呤霉素耐藥克隆中TERT的表達情況。陽性克隆進行傳代培養(yǎng)。MTT法和細胞周期檢測比較細胞的生長增殖能力;透射電鏡檢測細胞的超微結(jié)構(gòu),RT-PCR檢測泵功能相關(guān)基因的表達,Western blot檢測Na+/K+-ATPaseα1的表達,免疫熒光檢測ZO-1、N-cadherin的表達。結(jié)果 TERT-HCECs表達了外源的TERT已經(jīng)傳到36代,保持了正常的HCECs形態(tài)且比HCECs具有更強的增殖能力;泵功能相關(guān)基因、Na+/K+ATPaseα1、ZO-1的表達在TERT-HCECs和HCECs中差異無統(tǒng)計學(xué)意義。TERT-HCECs能形成單層結(jié)構(gòu),并保持與原代HCECs細胞相似的泵功能。結(jié)論通過轉(zhuǎn)染TERT,建立了一株與原代生理功能相近且具有更強增殖能力的TERT-HCECs。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院眼科;中山大學(xué)中山眼科中心眼科學(xué)國家重點實驗室;
【基金】：國家自然青年科學(xué)基金資助項目(編號:81300732) 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金立項課題(編號:B2013305) 廣東省自然科學(xué)基金面上項目(編號:2014A030313487)
【分類號】：R77
【正文快照】： 510060)人角膜內(nèi)皮細胞(human cornealendothelial cells,HCECs)來源于與神經(jīng)板分離的神經(jīng)嵴細胞,位于角膜最內(nèi)面,前面與后彈力層相連,后面接觸房水,是一層六角形立方上皮細胞。HCECs通過屏障功能和水泵機制保持角膜的透明性[1],其在體內(nèi)不能增殖[2],伴隨著年齡的老化[3]、眼

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 閔曉潔;周慶軍;劉廷;董曉光;謝立信;;TERT在視網(wǎng)膜新生血管模型中的動態(tài)表達及與Bcl-2的關(guān)系[J];眼科新進展;2009年04期

2 康鳳英,薛黎平;端粒酶催化亞單位TERT在實驗性外傷性PVR視網(wǎng)膜前膜的動態(tài)表達(英文)[J];國際眼科雜志;2004年02期

3 薛黎萍,康鳳英,胡世興,鄧新國,林少春;大鼠外傷性PVR視網(wǎng)膜前膜形成中TERT、PCNA和Bcl-2的變化(英文)[J];國際眼科雜志;2005年01期

4 ;[J];;年期

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本文編號：1153059