本文關(guān)鍵詞：表面分子CD25的下調(diào)延長(zhǎng)同種異體角膜植片存活的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： CD25 角膜移植排斥反應(yīng) 細(xì)胞因子 樹突狀細(xì)胞

【摘要】：目的:一、通過建立同種異體大鼠的角膜移植實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?探討CD25-siRNA基因治療能否抑制角膜移植免疫排斥反應(yīng),及其機(jī)制是否與調(diào)節(jié)Treg/Th1細(xì)胞因子的表達(dá)有關(guān)。二、通過建立同種異體小鼠的高危角膜移植實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?探討CD25單抗、雷帕霉素的效應(yīng)是否與DC細(xì)胞、Treg細(xì)胞的調(diào)節(jié)有關(guān)。方法:一、Wistar大鼠作為供體,SD大鼠作為受體,構(gòu)建大鼠的角膜移植模型。將術(shù)后大鼠隨機(jī)分為3組,分別為移植對(duì)照組、無(wú)義siRNA轉(zhuǎn)染組和CD25-siRNA轉(zhuǎn)染組。術(shù)后1周后開始,每天對(duì)植片行臨床評(píng)分。于術(shù)后14天行HE染色檢測(cè)角膜組織病理情況,行免疫組化檢測(cè)IL-10、TGF-β、IFN-γ、IL-1β、TNF-α和Foxp3因子的表達(dá)。分別于術(shù)后3、7、14、21天行流式檢測(cè)術(shù)后大鼠外周血中CD4+T細(xì)胞的比例。二、C57BL/6小鼠作為供體,Balb/c小鼠作為受體,受體右眼角膜縫線后2周行穿透性角膜移植手術(shù),構(gòu)建小鼠的高危角膜移植模型。將術(shù)后小鼠隨機(jī)分為4組,分別為移植對(duì)照組、CD25單抗組、雷帕霉素組和cd25單抗聯(lián)合雷帕霉素組。于術(shù)后12天行he和dc細(xì)胞的免疫組化。術(shù)后第12天應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析各組小鼠引流淋巴結(jié)、脾臟中cd4+t,treg細(xì)胞,dc細(xì)胞的比例;應(yīng)用qrt-pcr分析各組植片和引流淋巴結(jié)中細(xì)胞因子(ifn-γ、il-2、il-1β和tgf-β)的mrna表達(dá)水平。術(shù)后4周內(nèi)每日觀察角膜植片的存活情況。結(jié)果:一、在wistar—sd大鼠低危角膜移植模型中,與移植對(duì)照組、無(wú)義cd25sirna轉(zhuǎn)染組相比,cd25sirna轉(zhuǎn)染組植片渾濁、水腫及新生血管化指標(biāo)的評(píng)分減低,角膜植片的存活時(shí)長(zhǎng)顯著增加(p0.05)。術(shù)后第14天免疫組化顯示,cd25-sirna轉(zhuǎn)染組的il-10、tgf-β的表達(dá)高于另外兩組;ifn-γ、tnf-α和il-1β的表達(dá)低于另外兩組;而foxp3的表達(dá)三組之間無(wú)顯著差異。術(shù)后3、7、14、21天,對(duì)照組外周血cd4+t淋巴細(xì)胞亞群比例逐漸增加,而cd25-sirna轉(zhuǎn)染組的每個(gè)時(shí)間點(diǎn),cd4+t細(xì)胞的比例都低于對(duì)照組(p0.05)。二、在c57bl/6—balb/c小鼠高危穿透性角膜移植模型中,與對(duì)照組相比,干預(yù)組植片的存活時(shí)長(zhǎng)顯著增加(p0.05)。術(shù)后第12天,cd25單抗組、雷帕霉素組和cd25單抗聯(lián)合雷帕霉素組3組植片的炎癥減輕,dc細(xì)胞在植片的分布減少,引流淋巴結(jié)中dc細(xì)胞和cd4+t細(xì)胞所占比例減少。雷帕霉素組淋巴結(jié)的treg細(xì)胞比例高于對(duì)照組,cd25單抗組低于對(duì)照組,而聯(lián)合干預(yù)組treg細(xì)胞保持在對(duì)照組的一致水平。術(shù)后12天于對(duì)照組相比,3組干預(yù)組植片的ifn-γ、il-2、il-1βmrna明顯降低,此外,cd25單抗組、cd25單抗聯(lián)合雷帕霉素組的TGF-βmRNA顯著升高。結(jié)論:一、下調(diào)表面分子CD25的表達(dá)能有效抑制角膜移植排斥反應(yīng)的發(fā)生,延長(zhǎng)角膜植片的存活時(shí)間。二、CD25的下調(diào)減輕排斥反應(yīng)的機(jī)制,可能通過增加IL-10、TGF-β的表達(dá),降低IFN-γ、IL-1β和TNF-α的表達(dá)來(lái)完成。三、CD25的下調(diào)減輕排斥反應(yīng)的機(jī)制還可能通過抑制DC細(xì)胞成熟、遷移有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：CD25 角膜移植排斥反應(yīng) 細(xì)胞因子 樹突狀細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R779.65
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 CD25siRNA對(duì)同種異體角膜移植中Treg/Th1細(xì)胞因子的表達(dá)的影響15-23
• 1 材料與方法15-17
• 1.1 材料15-16
• 1.2 方法16-17
• 1.2.1 角膜移植模型的建立16
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組16
• 1.2.3 臨床觀察及評(píng)分16-17
• 1.2.4 術(shù)后植片組織病理學(xué)及Treg/Th1細(xì)胞因子的免疫組化檢查17
• 1.2.5 外周血的CD4+ T細(xì)胞的流式檢測(cè)17
• 1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析17
• 2 結(jié)果17-21
• 2.1 角膜移植術(shù)后臨床觀察及評(píng)分17-19
• 2.2 角膜植片HE及免疫組織化學(xué)染色結(jié)果19-20
• 2.3 術(shù)后外周血CD4+ T細(xì)胞的結(jié)果20-21
• 3 討論21-23
• 第二部分CD25單抗聯(lián)合雷帕霉素在高危同種異體角膜移植中對(duì)樹突狀細(xì)胞和Treg細(xì)胞的影響23-34
• 1 材料與方法23-26
• 1.1 材料23
• 1.2 方法23-26
• 1.2.1 小鼠高危角膜移植模型的建立23-24
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組24
• 1.2.3 臨床觀察及評(píng)分24
• 1.2.4 術(shù)后植片組織病理學(xué)及DC細(xì)胞的免疫組化檢查24
• 1.2.5 引流淋巴結(jié)、脾臟的DC，CD4+ T和Treg細(xì)胞的流式檢測(cè)24-25
• 1.2.6 植片和引流淋巴結(jié)細(xì)胞因子的m RNA檢測(cè)25
• 1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析25-26
• 2 結(jié)果26-30
• 2.1 小鼠高危角膜移植術(shù)后臨床觀察及評(píng)分26
• 2.2 角膜植片HE及DC細(xì)胞的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果26-27
• 2.3 淋巴結(jié)、脾臟的流式檢測(cè)的結(jié)果27-29
• 2.4 植片和淋巴結(jié)中細(xì)胞因子的表達(dá)29-30
• 3 討論30-34
• 全文小結(jié)34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 文獻(xiàn)綜述38-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章50

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本文編號(hào)：1013257