本文關鍵詞：表面分子CD25的下調延長同種異體角膜植片存活的實驗研究

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【摘要】：目的:一、通過建立同種異體大鼠的角膜移植實驗模型,探討CD25-siRNA基因治療能否抑制角膜移植免疫排斥反應,及其機制是否與調節(jié)Treg/Th1細胞因子的表達有關。二、通過建立同種異體小鼠的高危角膜移植實驗模型,探討CD25單抗、雷帕霉素的效應是否與DC細胞、Treg細胞的調節(jié)有關。方法:一、Wistar大鼠作為供體,SD大鼠作為受體,構建大鼠的角膜移植模型。將術后大鼠隨機分為3組,分別為移植對照組、無義siRNA轉染組和CD25-siRNA轉染組。術后1周后開始,每天對植片行臨床評分。于術后14天行HE染色檢測角膜組織病理情況,行免疫組化檢測IL-10、TGF-β、IFN-γ、IL-1β、TNF-α和Foxp3因子的表達。分別于術后3、7、14、21天行流式檢測術后大鼠外周血中CD4+T細胞的比例。二、C57BL/6小鼠作為供體,Balb/c小鼠作為受體,受體右眼角膜縫線后2周行穿透性角膜移植手術,構建小鼠的高危角膜移植模型。將術后小鼠隨機分為4組,分別為移植對照組、CD25單抗組、雷帕霉素組和cd25單抗聯(lián)合雷帕霉素組。于術后12天行he和dc細胞的免疫組化。術后第12天應用流式細胞儀分析各組小鼠引流淋巴結、脾臟中cd4+t,treg細胞,dc細胞的比例;應用qrt-pcr分析各組植片和引流淋巴結中細胞因子(ifn-γ、il-2、il-1β和tgf-β)的mrna表達水平。術后4周內每日觀察角膜植片的存活情況。結果:一、在wistar—sd大鼠低危角膜移植模型中,與移植對照組、無義cd25sirna轉染組相比,cd25sirna轉染組植片渾濁、水腫及新生血管化指標的評分減低,角膜植片的存活時長顯著增加(p0.05)。術后第14天免疫組化顯示,cd25-sirna轉染組的il-10、tgf-β的表達高于另外兩組;ifn-γ、tnf-α和il-1β的表達低于另外兩組;而foxp3的表達三組之間無顯著差異。術后3、7、14、21天,對照組外周血cd4+t淋巴細胞亞群比例逐漸增加,而cd25-sirna轉染組的每個時間點,cd4+t細胞的比例都低于對照組(p0.05)。二、在c57bl/6—balb/c小鼠高危穿透性角膜移植模型中,與對照組相比,干預組植片的存活時長顯著增加(p0.05)。術后第12天,cd25單抗組、雷帕霉素組和cd25單抗聯(lián)合雷帕霉素組3組植片的炎癥減輕,dc細胞在植片的分布減少,引流淋巴結中dc細胞和cd4+t細胞所占比例減少。雷帕霉素組淋巴結的treg細胞比例高于對照組,cd25單抗組低于對照組,而聯(lián)合干預組treg細胞保持在對照組的一致水平。術后12天于對照組相比,3組干預組植片的ifn-γ、il-2、il-1βmrna明顯降低,此外,cd25單抗組、cd25單抗聯(lián)合雷帕霉素組的TGF-βmRNA顯著升高。結論:一、下調表面分子CD25的表達能有效抑制角膜移植排斥反應的發(fā)生,延長角膜植片的存活時間。二、CD25的下調減輕排斥反應的機制,可能通過增加IL-10、TGF-β的表達,降低IFN-γ、IL-1β和TNF-α的表達來完成。三、CD25的下調減輕排斥反應的機制還可能通過抑制DC細胞成熟、遷移有關。
【關鍵詞】：CD25 角膜移植排斥反應 細胞因子 樹突狀細胞
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R779.65
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 CD25siRNA對同種異體角膜移植中Treg/Th1細胞因子的表達的影響15-23
• 1 材料與方法15-17
• 1.1 材料15-16
• 1.2 方法16-17
• 1.2.1 角膜移植模型的建立16
• 1.2.2 實驗分組16
• 1.2.3 臨床觀察及評分16-17
• 1.2.4 術后植片組織病理學及Treg/Th1細胞因子的免疫組化檢查17
• 1.2.5 外周血的CD4+ T細胞的流式檢測17
• 1.2.6 統(tǒng)計學分析17
• 2 結果17-21
• 2.1 角膜移植術后臨床觀察及評分17-19
• 2.2 角膜植片HE及免疫組織化學染色結果19-20
• 2.3 術后外周血CD4+ T細胞的結果20-21
• 3 討論21-23
• 第二部分CD25單抗聯(lián)合雷帕霉素在高危同種異體角膜移植中對樹突狀細胞和Treg細胞的影響23-34
• 1 材料與方法23-26
• 1.1 材料23
• 1.2 方法23-26
• 1.2.1 小鼠高危角膜移植模型的建立23-24
• 1.2.2 實驗分組24
• 1.2.3 臨床觀察及評分24
• 1.2.4 術后植片組織病理學及DC細胞的免疫組化檢查24
• 1.2.5 引流淋巴結、脾臟的DC，CD4+ T和Treg細胞的流式檢測24-25
• 1.2.6 植片和引流淋巴結細胞因子的m RNA檢測25
• 1.2.7 統(tǒng)計學分析25-26
• 2 結果26-30
• 2.1 小鼠高危角膜移植術后臨床觀察及評分26
• 2.2 角膜植片HE及DC細胞的免疫組織化學染色結果26-27
• 2.3 淋巴結、脾臟的流式檢測的結果27-29
• 2.4 植片和淋巴結中細胞因子的表達29-30
• 3 討論30-34
• 全文小結34-35
• 參考文獻35-38
• 文獻綜述38-49
• 參考文獻45-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的文章50

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