本文關鍵詞：HMGB1在BMSC移植治療MODS大鼠中的表達研究

  更多相關文章： 大鼠 多器官功能障礙綜合征 疾病模型 大鼠 多器官功能障礙綜合征 骨髓間充質干細胞 高遷移率族蛋白 炎癥

【摘要】：第一部分SD大鼠MODS模型的建立[目的]比較多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction sydrome, MODS)大鼠模型的不同制作方法,以確立最適宜、最穩(wěn)定的MODS的大鼠模型制作方案以供后期研究。[方法]成年健康雌性Sprague Dawley大鼠,體重190-210g,隨機分成9組,每組20只,A組輕度失血(血容量15%)+脂多糖腹腔注射30mg/kg;B組輕度失血(血容量15%)+脂多糖靜脈注射5mg/kg;C組脂多糖靜脈注射5mg/kg;D組脂多糖靜脈注射4mg/kg；E組脂多糖靜脈注射3mg/kg；F組脂多糖靜脈注射2mg/kg;G組脂多糖靜脈注射1mg/kg;H組脂多糖靜脈注射0.5mg/kg;Ⅰ組假手術組靜脈注射PBS 0.5ml/200g。造模后觀察各組大鼠行為學及死亡率,24h抽血測肝功(ALT、AST)、腎功(BUN、Cr)、心肌酶學(CK-MB、LDH)以及血常規(guī)(WBC、PLT),之后對大鼠進行解剖,觀察對比病理切片結果,綜合選定最佳方案。[結果]組間死亡率比較中A、B、C三組相同,均為90%,D、E組相同為80%,F、G組相同為60%,H組死亡率為40%,Ⅰ組死亡率為0；肝功、腎功、心肌酶學及血常規(guī)檢測中A-G組均較Ⅰ組有顯著差異,H組與Ⅰ組無顯著差異;大體標本顯示A-C組器官損傷嚴重,充血、淤血、水腫；病理切片顯示A-G均有炎性細胞浸潤及出血水腫等急性損傷表現(xiàn)。[結論]F、G兩組方案動物存活率相對較高,動物多個器官功能障礙,其中G組所用脂多糖劑量相對較少,為研究MODS最佳模型方法。第二部分HMGB1在BMSC移植治療MODS大鼠中的表達研究[目的]通過探究高遷移率族蛋白B1 (High mobility group protein B1, HMGB1)等炎癥因子在骨髓間充質干細胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)移植治療多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction sydrome, MODS)大鼠中的表達定位、表達含量的變化,以此來探討B(tài)MSC移植治療MODS大鼠的相關可能機制。[方法]體外獲得并培養(yǎng)BMSC,用綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)標記,經(jīng)外周靜脈輸入移植。成年雌性SD大鼠隨機分成3組,假手術組20只,模型組40只,移植組40只。脂多糖靜脈注射(1mg/kg)造模后2h內外周靜脈輸注干細胞2*10^6個/ml*0.5m1/只。移植組、模型組各取第1天心、肝、脾、肺、腎、腸組織制作切片,分別觀察GFP-BMSC在MODS大鼠中的歸巢以及HMGB1在MODS大鼠的的定位表達；取1、3、7、14天心、肝、脾、肺、腎、腸組織并通過Q-PCR、WesternBlot技術檢測HMGB1在心、肝、脾、肺、腎組織中的表達變化。[結果]體外培養(yǎng)的BMSC能夠正常貼壁成長并具有相應的分化能力,GFP轉染后不影響其正常生長及分化能力,抗原表達為CD34-/CD45-/CD90+/CD44+。移植后第1天在動物的組織切片中發(fā)現(xiàn)心、肝、脾、肺、腎器官組織中有綠色熒光存在,說明BMSC已經(jīng)發(fā)生歸巢；免疫組化結果顯示HMGB1在模型組中向胞漿轉移；Q-PCR、WesternBlot檢測結果顯示正常心、肝、脾、肺、腎組織中均有HMGB1的表達；模型組大部分臟器HMGB1的表達量較正常組明顯增加(P0.05),而移植組大部分臟器HMGB1的表達量低于模型組(P0.05)。[結論]①建立了GFP標記的SD大鼠BMSC的體外分離、培養(yǎng)及鑒定的技術平臺。② Q-PCR、WesternBlot結果顯示正常組織心、肝、脾、肺、腎臟器中均有HMGB1的表達,而BMSC能夠下調HMGB1在MODS模型動物的心、肝、脾、肺、腎組織中的表達,提示BMSC移植可以降低炎癥反應,有望為MODS提供新的治療方法。
【關鍵詞】：大鼠 多器官功能障礙綜合征 疾病模型 大鼠 多器官功能障礙綜合征 骨髓間充質干細胞 高遷移率族蛋白 炎癥
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R614
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-12
• 第一部分 SD大鼠MODS模型的建立12-33
• 前言12-14
• 材料與方法14-21
• 結果21-28
• 討論28-30
• 結論30-31
• 參考文獻31-33
• 第二部分 HMGB1在BMSC移植治療MODS大鼠中的表達研究33-78
• 前言33-37
• 材料與方法37-52
• 結果52-68
• 討論68-73
• 結論73-74
• 參考文獻74-78
• 綜述一78-85
• 參考文獻82-85
• 綜述二85-93
• 參考文獻90-93
• 攻讀學位期間獲得的學術成果及獲獎93-94
• 致謝94-96
• 附件96

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本文編號：919091