本文關(guān)鍵詞：VEGI對(duì)腦外傷小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞的激活與極化影響

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【摘要】：研究目的:近期研究結(jié)果表明,顱腦外傷后腦內(nèi)的炎癥反應(yīng)能加劇繼發(fā)性腦損傷的病理生理過(guò)程,這些變化若持續(xù)存在會(huì)加重腦水腫的癥狀、增高顱內(nèi)壓、進(jìn)一步導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡,引起神經(jīng)功能癥狀,極大加重了原發(fā)性腦損傷造成的危害。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子(Vascular Endothelial Growth Inhibitor,VEGI)是腫瘤壞死因子超家族的成員之一,顧名思義,VEGI具有抑制腫瘤新生血管的特性,除此之外,其還在多種疾病中發(fā)揮重要作用。近期,VEGI因在炎癥性腸病中的作用而受到廣泛關(guān)注。因此VEGI除了作用于新生血管抑制腫瘤生長(zhǎng),還能調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和抑制水腫生成。本實(shí)驗(yàn)課題采用的是液壓打擊的方法來(lái)制作小鼠閉合性顱腦損傷的模型,在此基礎(chǔ)上我們探討小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細(xì)胞激活和極化的時(shí)間點(diǎn)變化,同時(shí)我們給予VEGI干預(yù)治療,與對(duì)照組相比較觀察VEGI會(huì)不會(huì)調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞的激活甚至極化。我們也探討給予VEGI干預(yù)后小鼠腦外傷后的腦水腫和神經(jīng)功能的恢復(fù)情況是否有所改善。研究方法:制備腦外傷動(dòng)物模型的方法有多種,本課題我們采用較為成熟的液壓打擊法(FPI)來(lái)制備小鼠閉合性顱腦外傷的模型,所選取的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為SPF級(jí)健康成年雄性小鼠C57老鼠180只,對(duì)每只小鼠進(jìn)行編號(hào),按照隨機(jī)數(shù)列表,隨機(jī)將小鼠分為假手術(shù)組(Sham組)、腦外傷組(TBI組)、腦外傷后鼠尾靜脈注射VEGI干預(yù)組(TBI+VEGI組)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。其中腦外傷組繼續(xù)分組,根據(jù)傷后時(shí)間點(diǎn)的不同,將組內(nèi)小鼠分為傷后1 h、6 h、1 d、3 d、7 d、14 d和21 d組,每組小鼠數(shù)量保持為5只,處死動(dòng)物取出小鼠腦組織,進(jìn)行石蠟包埋切片制備成組織切片,采用免疫組化的技術(shù),觀察小鼠創(chuàng)傷灶周圍小膠質(zhì)細(xì)胞的浸潤(rùn)情況。腦外傷后腹腔注射VEGI干預(yù)組(TBI+VEGI組)根據(jù)傷后處死時(shí)間點(diǎn)不同,再分為傷后1 d、3 d、5d、7 d組,每組動(dòng)物5只,按照同樣的方法,觀察VEGI+TBI組小鼠傷灶周圍的小膠質(zhì)細(xì)胞變化情況。為了觀察VEGI+TBI組小鼠和TBI組小鼠在腦外傷后第1天和第3天的腦水腫情況,我們采用干濕重的方法進(jìn)行計(jì)算腦組織中的水含量。而血腦屏障的通透性采用伊文氏藍(lán)滲透的方法,用熒光密度儀測(cè)含量,計(jì)算出通透性的大小。神經(jīng)功能情況采用改良神經(jīng)功能評(píng)分法(mNSS)的方法,相對(duì)可靠客觀。研究結(jié)果:應(yīng)用液壓打擊方法成功建立中度小鼠顱腦損傷模型,用HE染色后每個(gè)組小鼠腦組織均觀察到典型的TBI后的病理變化,出現(xiàn)創(chuàng)傷灶。免疫組織化學(xué)染色顯示,小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細(xì)胞被激活,出現(xiàn)不同亞型(M1型和M2型),并且廣義小膠質(zhì)細(xì)胞在傷后第7天達(dá)到高峰,隨后下降,而M1型和M2型小膠質(zhì)細(xì)胞在第5天到達(dá)峰值,M1型維持在高值,隨后緩慢下降,M2型高峰后迅速降低。TBI+VEGI組與TBI組相比,在小鼠顱腦外傷后第3天,第5天,第7天TBI+VEGI組小鼠創(chuàng)傷灶周圍小膠質(zhì)細(xì)胞的浸潤(rùn)數(shù)量明顯減少(P0.05)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),VEGI可以影響小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細(xì)胞的極化,與TBI組相比,TBI+VEGI組小鼠外傷后M1型(CD11C+)小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯減少,而M2型(Arg-1+)小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量則比TBI組明顯增多,各時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。干濕重法觀察發(fā)現(xiàn):小鼠顱腦外傷后,與空白對(duì)照組相比,TBI組和TBI+VEGI組腦水含量均明顯增加;在傷后第3,5,7天,給予VEGI干預(yù)的小鼠腦組織中水含量明顯低于單純TBI組,且各個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。伊文氏藍(lán)滲透率實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):在給予VEGI干預(yù)后小鼠血腦屏障的滲透率明顯降低,低于TBI組,兩者之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。研究結(jié)論:1、小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細(xì)胞能夠被激活,并在傷后第7天達(dá)到峰值,M1型小膠質(zhì)細(xì)胞第5天達(dá)到峰值,隨后輕微降低,M2型小膠質(zhì)細(xì)胞第5天達(dá)到峰值,隨后降低。2、小鼠顱腦外傷后腦水腫急劇增加,在第3天達(dá)到高峰。3、VEGI減少TBI后小膠質(zhì)細(xì)胞的激活,并且可以抑制M1型小膠質(zhì)細(xì)胞的激活,增加了M2型小膠質(zhì)細(xì)胞的激活,猜測(cè)VEGI可以通過(guò)調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞的極化來(lái)影響外傷后腦內(nèi)炎癥反應(yīng)。4、VEGI通過(guò)調(diào)節(jié)TBI腦內(nèi)炎癥反應(yīng),有效減少腦水腫,促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)抑制因子 創(chuàng)傷性腦損傷 小膠質(zhì)細(xì)胞 免疫 炎癥 腦水腫
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R651.15
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)11-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、顱腦外傷小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞的激活與極化時(shí)間變化16-32
• 1.1 對(duì)象和方法16-24
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組16
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器16-18
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑18-19
• 1.1.4 小鼠液壓打擊模型的制備19-20
• 1.1.5 小鼠腦組織石蠟切片的制備20-22
• 1.1.6 腦組織石蠟切片免疫組織化學(xué)染色方法22-24
• 1.1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法24
• 1.2 結(jié)果24-29
• 1.2.1 建立小鼠中型顱腦損傷模型24-25
• 1.2.2 觀察小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細(xì)胞激活及極化的時(shí)間變化25-29
• 1.3 討論29-31
• 1.4 小結(jié)31-32
• 二、VEGI對(duì)顱腦外傷小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞激活及極化影響32-50
• 2.1 對(duì)象和方法32-36
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組32
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器32
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑32-33
• 2.1.4 小鼠液壓打擊模型的制備33
• 2.1.5 小鼠腦組織石蠟切片的制備33
• 2.1.6 腦組織石蠟切片免疫組織化學(xué)染色方法33
• 2.1.7 小鼠腦組織水含量的測(cè)定（干濕法）33-34
• 2.1.8 小鼠血腦屏障滲透率的測(cè)定34
• 2.1.9 mNSS評(píng)價(jià)小鼠顱腦外傷后神經(jīng)功能恢復(fù)情況34-35
• 2.1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法35-36
• 2.2 結(jié)果36-40
• 2.2.1 VEGI可以減少創(chuàng)傷灶周圍小膠質(zhì)細(xì)胞的浸潤(rùn)，減輕炎癥反應(yīng)36
• 2.2.2 VEGI可以影響小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細(xì)胞的極化36-38
• 2.2.3 VEGI降低血腦屏障滲透率，減輕腦水腫38-39
• 2.2.4 VEGI可以改善小鼠顱腦外傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)39-40
• 2.3 討論40-48
• 2.4 小結(jié)48-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明56-57
• 綜述 小膠質(zhì)細(xì)胞在創(chuàng)傷性顱腦損傷中的進(jìn)展性研究57-65
• 綜述參考文獻(xiàn)62-65
• 致謝65-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷66

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本文編號(hào)：870545