本文關(guān)鍵詞：IL-22對肝損傷小鼠部分肝切除后肝再生的作用

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【摘要】：肝臟疾病多種多樣,包括各種原因?qū)е碌牟《拘曰蚓凭愿窝住⒏闻K纖維化和肝細(xì)胞癌,嚴(yán)重威脅到人類的健康。白細(xì)胞介素-22(interleukin-22,IL-22)因子是一種近年來新研究發(fā)現(xiàn)的CD4+Th細(xì)胞因子的一種,參與機(jī)體免疫系統(tǒng)的多種病理反應(yīng),能夠促進(jìn)組織的快速修復(fù)和促進(jìn)炎癥反應(yīng)的雙重功效。然而對于其具體作用的分子生物學(xué)機(jī)制我們尚不十分明確。目前對白細(xì)胞介素-22的作用機(jī)理研究尚處于初始階段,白細(xì)胞介素-22與其他細(xì)胞因子的相關(guān)性及具體作用,仍需我們應(yīng)用相關(guān)科學(xué)技術(shù)及實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行更深的探索。近年來對白細(xì)胞介素-22的探索也取得了一定的成效,為其在肝臟疾病中肝損傷修復(fù)和促進(jìn)肝再生的作用機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。第一部分小鼠70%肝切除模型的改良研究目的建立一種高效、簡易的小鼠70%肝臟切除模型,為研究肝臟損傷修復(fù)和再生的機(jī)制研究提供新的模型平臺(tái)。方法8-12周的C57BL/6雄性小鼠(20-25g)150只,隨機(jī)分成兩組:經(jīng)典組(保留入肝血流組)和改良組(阻斷入肝血流組)。分別采用兩種建模方法建立小鼠70%肝臟切除模型。比較術(shù)后小鼠的生存率和肝再生情況。結(jié)果存活率改良組(97.3%)顯著高于經(jīng)典組(86.7%),其中術(shù)后膽漏、出血和腔靜脈狹窄的發(fā)生率,改良法顯著低于經(jīng)典法;而兩組肝切除術(shù)后肝臟再生情況無顯著差異。結(jié)論通過結(jié)扎血管阻斷入肝血流、結(jié)扎膽道阻斷入肝血流,然后行70%肝葉切除法建立的小鼠肝切除模型,簡便易行,并發(fā)癥少,成功率高,為肝再生的細(xì)胞分子生物學(xué)機(jī)制研究提供了理想的肝切除模型。第二部分外源性的白細(xì)胞介素-22對刀豆蛋白A介導(dǎo)的肝損傷小鼠部分肝切除后肝再生的作用研究目的探討刀豆蛋白A介導(dǎo)的肝損傷小鼠行部分肝切除術(shù)后白細(xì)胞介素-22對其肝臟再生的治療作用及機(jī)制研究。方法100只C57BL/6小鼠,隨機(jī)分成PH組(單一70%肝切除組)、ConA組(單一刀豆蛋白A損傷組)、ConA+PH組(刀豆蛋白A損傷后行70%肝切除組)和ConA+IL-22+PH組(刀豆蛋白A損傷后經(jīng)白細(xì)胞介素-22干預(yù)再行70%肝切除組),然后每組分別于術(shù)后32h、40h、48h、1w、2w各處死5只,取其血清和肝臟組織。稱肝葉重量計(jì)算肝再生率,生化檢測不同時(shí)間點(diǎn)肝功能(丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、白蛋白(ALB))的變化,做病理切片觀察各時(shí)間點(diǎn)的病理損傷,免疫組化法檢測不同時(shí)間點(diǎn)肝臟組織中增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的含量,計(jì)算PCNA指數(shù),Western Blot檢測細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)水平了解細(xì)胞周期改變情況,實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RQ-PCR)檢測不同時(shí)間點(diǎn)甲胎蛋白信使核糖核酸(AFPmRNA)的表達(dá)。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和線性相關(guān)分析比較各組的變化。結(jié)果經(jīng)白細(xì)胞介素-22處理后,小鼠肝再生顯著,術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)(40h、48h、1w、2w),ConA+PH+IL-22干預(yù)組小鼠肝質(zhì)量/體質(zhì)量(3.16±0.17,3.34±0.13,4.19±0.14,5.14±0.16)明顯高于ConA+PH組(2.95±0.14、3.09±0.14、3.78±0.10、4.89±0.12),顯著減輕ConA對肝組織的損傷,且在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)ConA+PH損傷組再生肝組織內(nèi)STAT3蛋白和Cyclin D1蛋白表達(dá)量以及AFPmRNA基因的水平明顯低于其余組,經(jīng)白細(xì)胞介素-22預(yù)處理后再生肝組織內(nèi)STAT3蛋白和Cyclin D1蛋白表達(dá)量及AFPmRNA基因的水平顯著高于其余組。結(jié)論白細(xì)胞介素-22在刀豆蛋白A介導(dǎo)的肝損傷小鼠部分肝切除術(shù)后再生過程中有明顯的促進(jìn)作用,該作用可能是白細(xì)胞介素-22通過與受體結(jié)合后激活STAT3介導(dǎo)的信號通路,從而活化細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)以及AFPmRNA基因的表達(dá),促進(jìn)肝細(xì)胞增殖再生,修復(fù)肝損傷。
【關(guān)鍵詞】：小鼠 肝再生動(dòng)物模型 肝 70%切除術(shù) 白細(xì)胞介素-22 刀豆蛋白 A
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R657.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、小鼠 70％肝切除模型的改良16-30
• 對象和方法16-21
• 1.1 主要材料、試劑與儀器設(shè)備16-17
• 1.1.1 主要試劑16
• 1.1.2 主要儀器16-17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-21
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組17
• 1.2.2 小鼠肝切除模型的建立17-18
• 1.2.3 觀察術(shù)后小鼠的生存狀況18-19
• 1.2.4 術(shù)后小鼠肝/體重比的測定19
• 1.2.5 術(shù)后小鼠PCNA表達(dá)水平的測定19-20
• 1.2.6 統(tǒng)計(jì)方法20-21
• 結(jié)果21-24
• 2.1 兩種方法的存活率及死亡原因比較21
• 2.2 肝再生恢復(fù)情況比較21-22
• 2.3 PCNA表達(dá)水平比較22-24
• 討論24-29
• 小結(jié)29-30
• 二、外源性的白細(xì)胞介素-22對刀豆蛋白A介導(dǎo)的肝損傷小鼠部分肝切除后肝再生的作用30-47
• 對象和方法30-38
• 1.1 主要材料、試劑與儀器設(shè)備30-32
• 1.1.1 主要試劑30-31
• 1.1.2 主要儀器31-32
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法32-37
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組32
• 1.2.2 小鼠肝再生模型的建立32-33
• 1.2.3 標(biāo)本收集33-34
• 1.2.4 術(shù)后小鼠肝/體重比的測定34
• 1.2.5 術(shù)后小鼠血清生化分析34
• 1.2.6 術(shù)后小鼠肝臟組織標(biāo)本石蠟切片及HE染色34
• 1.2.7 術(shù)后小鼠肝臟組織切片增值變化34
• 1.2.8 術(shù)后小鼠肝臟組織AFPm RNA變化34-36
• 1.2.9 術(shù)后小鼠Cyclin D1、STAT3蛋白的表達(dá)變化36-37
• 1.3 統(tǒng)計(jì)方法37-38
• 結(jié)果38-43
• 2.1 術(shù)后小鼠肝/體重質(zhì)量比的變化38
• 2.2 術(shù)后小鼠血清中ALT、AST水平變化38-39
• 2.3 小鼠肝臟組織HE染色結(jié)果39-40
• 2.4 小鼠肝臟組織細(xì)胞增殖變化40-41
• 2.5 小鼠肝臟組織細(xì)胞AFPm RNA基因的表達(dá)變化41-42
• 2.6 術(shù)后小鼠CyclinD1、STAT3蛋白的表達(dá)變化42-43
• 討論43-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明55-57
• 綜述 白細(xì)胞介素-22 與肝臟疾病關(guān)系的研究進(jìn)展57-64
• 綜述參考文獻(xiàn)61-64
• 致謝64-65
• 個(gè)人簡歷65

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本文編號：795462