本文關(guān)鍵詞：飽和氫氣生理鹽水對大鼠肝移植術(shù)后急性腎損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究飽和氫氣生理鹽水對大鼠原位肝移植術(shù)后急性腎損傷的保護(hù)作用,并進(jìn)一步探討自噬參與其腎臟保護(hù)效應(yīng)的分子機(jī)制。方法:健康成年雄性SD大鼠56只,周齡8~10周,體重220~250 g,采取隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組(n=8):假手術(shù)組、大鼠原位肝移植模型組(OLT組)、飽和氫氣生理鹽水處理組(HS組)及氯喹預(yù)處理組(CQ組),其中假手術(shù)組8只,其它三組均為8對。假手術(shù)組行單純開關(guān)腹操作,并游離相應(yīng)血管和肝周韌帶;大鼠原位肝移植模型組建立大鼠原位肝移植模型,并于無肝期前5 min經(jīng)下腔靜脈緩慢注射生理鹽水6 ml/kg;飽和氫氣生理鹽水處理組于無肝期前5 min經(jīng)下腔靜脈緩慢注射飽和氫氣生理鹽水6 ml/kg,其它操作同大鼠原位肝移植模型組;氯喹預(yù)處理組于模型建立前1 h經(jīng)腹腔注射自噬特異性抑制劑氯喹60mg/kg,其它處理同飽和氫氣生理鹽水處理組。再灌注后6 h抽取靜脈血樣和腎組織檢測血清學(xué)和組織學(xué)指標(biāo),通過檢測血清尿素氮(BUN)及肌酐(Cr)水平評價(jià)腎功能情況,測定腎組織丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性評價(jià)腎臟氧化應(yīng)激程度,通過伊紅-美藍(lán)(HE)染色于光學(xué)顯微鏡下觀察腎組織形態(tài)學(xué)改變,并行腎小管損傷評分;采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記(TUNEL)染色法定量檢測腎小管上皮細(xì)胞凋亡情況,計(jì)算凋亡指數(shù);采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測活化的caspase-3、細(xì)胞色素c(Cyt c)等凋亡相關(guān)m RNA的表達(dá)水平;通過蛋白免疫印跡法(western blot)檢測磷酸化p53(p-53)、微管相關(guān)蛋白輕鏈3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Beclin-1、活化的caspase-3和細(xì)胞色素c(Cyt c)等自噬及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平;并且通過透射電子顯微鏡觀察自噬小體和自噬溶酶體的形成情況以及腎小管上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果:與假手術(shù)組比較,OLT組腎功能顯著降低,腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)空泡及管型,腎小管損傷評分增加,腎臟氧化應(yīng)激水平升高,細(xì)胞凋亡明顯增加,凋亡指數(shù)升高,活化的caspase-3和Cyt c的表達(dá)水平顯著上調(diào),p53磷酸化、LC3Ⅱ及Beclin-1的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與OLT組比較,HS組大鼠腎功能明顯改善,腎組織空泡樣改變減少,腎小管損傷評分降低,腎臟氧化應(yīng)激損傷減輕,細(xì)胞凋亡明顯減少,凋亡指數(shù)降低,并且活化的caspase-3和Cyt c的表達(dá)水平顯著降低,與此同時(shí),p53磷酸化、LC3Ⅱ及Beclin-1的表達(dá)明顯上調(diào),透射電鏡下可見自噬小體和自噬溶酶體的形成增加;與HS組比較,CQ組大鼠腎功能降低,腎組織病理學(xué)損傷嚴(yán)重,腎小管損傷評分和凋亡指數(shù)升高,腎臟氧化應(yīng)激水平升高,細(xì)胞凋亡增加,活化的caspase-3和Cyt c的表達(dá)水平上調(diào),LC3Ⅱ及Beclin-1的表達(dá)下調(diào),p53磷酸化的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,應(yīng)用氯喹抑制自噬后部分抵消了飽和氫氣生理鹽水的腎臟保護(hù)效應(yīng)。結(jié)論:飽和氫氣生理鹽水可通過調(diào)控p53磷酸化的表達(dá),誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的激活,并且自噬激活通過抑制腎小管上皮細(xì)胞凋亡、減輕腎臟氧化應(yīng)激損傷等途徑緩解大鼠原位肝移植術(shù)后急性腎損傷。
【關(guān)鍵詞】：氫 肝移植 腎損傷 自噬 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R614
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號(hào)說明10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11
• 研究目的、方法11-13
• 1 對象和方法13-25
• 1.1 對象13-14
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物13
• 1.1.2 主要試劑13
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備13-14
• 1.1.4 飽和氫氣生理鹽水的制備14
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和模型建立14-16
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組14
• 1.2.2 大鼠原位肝移植模型的建立14-15
• 1.2.3 大鼠原位肝移植術(shù)中平均動(dòng)脈血壓的監(jiān)測15-16
• 1.3 標(biāo)本采集16
• 1.3.1 血液標(biāo)本的采集16
• 1.3.2 腎組織標(biāo)本的采集16
• 1.4 項(xiàng)目檢測與方法16-25
• 1.4.1 血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）的檢測16
• 1.4.2 腎組織丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的檢測16-19
• 1.4.3 腎組織病理學(xué)檢測19
• 1.4.4 TUNEL檢測腎小管上皮細(xì)胞凋亡情況19-20
• 1.4.5 凋亡相關(guān)mRNA的檢測20-22
• 1.4.6 腎小管上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的檢測22
• 1.4.7 自噬及凋亡相關(guān)蛋白的檢測22-25
• 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析25
• 2 結(jié)果25-32
• 2.1 大鼠肝移植術(shù)中平均動(dòng)脈血壓的改變25
• 2.2 各組大鼠腎功能和氧化應(yīng)激水平比較25-26
• 2.3 各組大鼠腎組織病理學(xué)改變26-29
• 2.4 各組大鼠凋亡情況比較29-30
• 2.5 腎小管上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變30-31
• 2.6 各組大鼠自噬相關(guān)蛋白的比較31-32
• 3 討論32-39
• 3.1 動(dòng)物模型的建立32-33
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇32
• 3.1.2 大鼠原位肝移植模型的建立32-33
• 3.2 肝移植術(shù)后急性腎損傷的機(jī)制33-34
• 3.3 氫氣與急性腎損傷34
• 3.4 自噬與急性腎損傷34-39
• 3.4.1 哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制自噬35
• 3.4.2 急性腎損傷誘導(dǎo)自噬35-36
• 3.4.3 自噬調(diào)控的分子機(jī)制36-37
• 3.4.4 自噬參與腎損傷保護(hù)的機(jī)制37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-46
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明46-47
• 綜述 含氫液/氫氣用于器官功能保護(hù)的研究進(jìn)展47-55
• 綜述參考文獻(xiàn)51-55
• 致謝55-56
• 個(gè)人簡介56

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  本文關(guān)鍵詞：飽和氫氣生理鹽水對大鼠肝移植術(shù)后急性腎損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：442599