[目的]椎間盤退變(Intervertebral degenerative disc,IVDD)是脊柱退行性疾病的病理基礎(chǔ),引起下腰痛的重要原因。目前,臨床上針對IVDD的治療手段主要以緩解臨床癥狀為主,并不能阻止、延緩或逆轉(zhuǎn)IVDD病理進(jìn)程,尚無有效的防治措施。IVDD是一個(gè)繁瑣的過程,它的發(fā)生及復(fù)發(fā)率高且危害大,受多要素、復(fù)雜機(jī)制調(diào)節(jié),對IVDD發(fā)生的具體機(jī)制尚不清楚。研究證明髓核細(xì)胞的凋亡和數(shù)量減少會導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)合成減少,破壞細(xì)胞外基質(zhì)合成與降解動態(tài)平衡,可導(dǎo)致椎間盤退變。在脊柱椎間盤退變的進(jìn)程中,炎癥反應(yīng)是其一個(gè)主要的病理變化,非編碼小RNA(MicroRNAs、miRNAs)參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和炎癥反應(yīng)。但是,MicroRNAs在炎癥反應(yīng)條件下如何參與調(diào)控髓核細(xì)胞外基質(zhì)降解的作用還不完全清楚。因此,本研究旨在:體外培養(yǎng)髓核細(xì)胞及構(gòu)建髓核細(xì)胞炎癥損傷模型,研究miRNA-503在IL-1β引起的人椎間盤髓核細(xì)胞外基質(zhì)降解中的作用,為防治椎間盤退變提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[方法]1.第一部分,(1)收集10例因椎間盤突出癥在椎間孔孔鏡下摘除的椎間盤髓核標(biāo)本[Pfirrma...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．?１?．人髓核細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色（１０?Ｘ?）??２．?２?ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測髄核細(xì)胞角蛋白１９ｍＲＮＡ的鑒定結(jié)果??

利用甲苯胺藍(lán)可將細(xì)胞質(zhì)內(nèi)蛋白多糖染成藍(lán)色的特點(diǎn)，我們將髓核細(xì)胞爬片??后行甲苯胺藍(lán)染色。染色結(jié)果顯示甲苯胺藍(lán)為陽性表現(xiàn)，所培養(yǎng)髓核細(xì)胞胞漿呈??藍(lán)色，且胞核附近著色程度較深（圖２．１），提示所培養(yǎng)髓核細(xì)胞合成聚集蛋白??聚糖。蘇木素復(fù)染，細(xì)胞核呈藍(lán)色。??圖２．?１?．人髓核細(xì)胞....

圖１．分離培養(yǎng)的椎間盤髓核細(xì)胞形態(tài)圖（２００Ｘ）??

與其他細(xì)胞相接觸，２０天細(xì)胞呈后放射狀、片狀，３０天后呈團(tuán)簇狀??生長分布，Ｐ０代髓核細(xì)胞胞漿內(nèi)分泌顆粒較少，Ｐ１代髓核細(xì)胞胞漿內(nèi)分泌顆粒??明顯增多。（圖１）??——??ｍ：：ｒ?－??■■ＨＩ??２１??

圖2.3.1K19擴(kuò)增曲線圖

用ＲＴ－ＰＣＲ檢測Ｋ－１９在人的髓核細(xì)胞中與人纖維環(huán)細(xì)胞中的表達(dá)情況，與對??照組相比，可以發(fā)現(xiàn)人的髓核細(xì)胞中的Ｋ－１９顯著高表達(dá)（Ｐ＜０．?０５）。因此進(jìn)一??步證實(shí)培養(yǎng)的髓核細(xì)胞的真實(shí)可靠性，為后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。??Ｋｅｒａｔｉｎ１９??１５－．??〇??Ｃ?＊＊＊??....

圖２．?３．?３?Ｋ１９ｍＲＮＡ在人的髓核細(xì)胞中與人纖維環(huán)細(xì)胞中相比顯著高表達(dá)

利用甲苯胺藍(lán)可將細(xì)胞質(zhì)內(nèi)蛋白多糖染成藍(lán)色的特點(diǎn)，我們將髓核細(xì)胞爬片??后行甲苯胺藍(lán)染色。染色結(jié)果顯示甲苯胺藍(lán)為陽性表現(xiàn)，所培養(yǎng)髓核細(xì)胞胞漿呈??藍(lán)色，且胞核附近著色程度較深（圖２．１），提示所培養(yǎng)髓核細(xì)胞合成聚集蛋白??聚糖。蘇木素復(fù)染，細(xì)胞核呈藍(lán)色。??圖２．?１?．人髓核細(xì)胞....

本文編號：4028805