骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)是全世界影響最廣泛的退行性慢性骨關(guān)節(jié)疾病,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量,并造成了巨大的社會經(jīng)濟成本。其特征在于關(guān)節(jié)軟骨的退化導(dǎo)致的疼痛和功能受限。表觀遺傳(epigenetics)指在不改變DNA序列的情況下,通過DNA甲基化、組蛋白修飾、染色質(zhì)重塑和微小RNA(miRNA)等方式所進行的遺傳學(xué)修飾。其中,EZH2(Enhancerof Zeste Homolog2)作為特異性的甲基化酶,使組蛋白H3上的27位賴氨酸發(fā)生三甲基化修飾,從而參與表觀遺傳學(xué)調(diào)控。已有越來越多的研究揭示了表觀遺傳學(xué)在骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展過程中扮演了重要角色。為探究骨骼發(fā)育與骨關(guān)節(jié)炎中Ezh2的影響與機制,我們進行了本課題的研究。在本研究中,我們利用GEO(GENEEXPRESSIONOMNIBUS)數(shù)據(jù)庫,C57BL/6J小鼠的骨關(guān)節(jié)炎模型以及人OA樣本,觀察了Ezh2在骨關(guān)節(jié)炎軟骨中的表達(dá)情況,并利用Col2a1-CreERr2;Ezh2f/f基因敲除系統(tǒng)小鼠行Ezh2條件性敲除,借以研究Ezh2軟骨特異性敲除對胚胎與青春期骨軟骨發(fā)育以及創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎的影響。最后,通過對...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞
緒論
第一章 軟骨特異性敲除Ezh2對肢體發(fā)育的影響
    1.1 引言
    1.2 實驗試劑與儀器
        1.2.1 材料和試劑
        1.2.2 相關(guān)染液的配制
    1.3 實驗方法
        1.3.1 胚胎小鼠Ezh2軟骨特異性敲除
        1.3.2 小鼠基因型鑒定
        1.3.3 全骨骼染色
        1.3.4 H&E染色
        1.3.5 統(tǒng)計學(xué)
        1.3.6 青春期小鼠Ezh2特異性敲除模型造模
        1.3.7 Safranin-O染色
        1.3.8 免疫組化
    1.4 實驗結(jié)果
        Ezh2敲除對小鼠胚胎發(fā)育的影響
            1.4.1 胚胎期敲除Ezh2導(dǎo)致胚胎短縮畸形
            1.4.2 胚胎期敲除Ezh2導(dǎo)致胚胎長骨結(jié)構(gòu)畸形
        Ezh2敲除對小鼠青春期發(fā)育的影響
            1.4.3 青春期敲除Ezh2導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨合成代謝增強
    1.5 討論
第二章 EZH2在骨關(guān)節(jié)炎中的表達(dá)
    2.1 引言
    2.2 實驗試劑與儀器
        2.2.1 材料和試劑
        2.2.2 相關(guān)染液的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 小鼠骨關(guān)節(jié)炎造模
        2.3.2 動物實驗分組
        2.3.3 組織免疫熒光
        2.3.4 Western-blot
        2.3.5 關(guān)節(jié)炎患者軟骨樣本收集和確認(rèn)
        2.3.6 Safranin-O染色
        2.3.7 人OA樣本組織學(xué)評分
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 EZH2在人與鼠骨關(guān)節(jié)炎軟骨樣本中表達(dá)上升
        2.4.2 人骨關(guān)節(jié)炎病患中存在EZH2陽性表達(dá)的亞群
    2.5 討論
第三章 軟骨特異性敲除Ezh2對創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎進展的研究
    3.1 引言
    3.2 實驗試劑與儀器
        3.2.1 材料和試劑
        3.2.2 相關(guān)染液的配置
    3.3 實驗方法
        3.3.1 小鼠基因型鑒定
        3.3.2 實時熒光定量PCR(Real time PCR)
        3.3.3 Western-blot
        3.3.4 敲基因鼠骨關(guān)節(jié)炎造模
        3.3.5 Safranin-O染色
        3.3.6 OA的OARSI評分
        3.3.7 免疫熒光
        3.3.8 免疫組化
        3.3.9 敲基因鼠骨軟骨缺損造模
        3.3.10 骨軟骨損傷的ICRSII組織學(xué)評分
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 在成年小鼠體內(nèi)成功敲除EZH2
        3.4.2 軟骨特異性敲除Ezh2加重骨關(guān)節(jié)炎進展
        3.4.3 Ezh2通過影響軟骨細(xì)胞增殖與基質(zhì)代謝影響骨關(guān)節(jié)炎發(fā)展
        3.4.4 Ezh2通過影響軟骨基質(zhì)合成影響骨軟骨缺損修復(fù)
    3.5 討論
第四章 Ezh2調(diào)節(jié)軟骨損傷修復(fù)的機制研究
    4.1 引言
    4.2 實驗試劑與儀器
        4.2.1 材料和試劑
    4.3 實驗方法
        4.3.1 敲基因鼠原代軟骨提取與培養(yǎng)
        4.3.2 體外基因敲除
        4.3.3 RNA-Seq
        4.3.4 Western-blot
        4.3.5 實時熒光定量PCR (Real time PCR)
        4.3.6 CCK-8測定細(xì)胞增殖曲線
        4.3.7 骨關(guān)節(jié)炎患者K-L評分
        4.3.8 劃痕實驗測定細(xì)胞損傷修復(fù)
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 敲除Ezh2的原代軟骨在TNF信號通路出現(xiàn)下調(diào)
        4.4.2 人骨關(guān)節(jié)炎Ezh2陽性亞群在TNFSF13B上具有差異性表達(dá)
        4.4.3 敲除Ezh2對細(xì)胞軟骨肥大骨化相關(guān)標(biāo)志物的影響
        4.4.4 Ezh2通過TNFSF13B促進細(xì)胞損傷修復(fù)
    4.5 討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
作者簡歷



本文編號：3964735