目的:1.體外分離、培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs),鑒定后建立穩(wěn)定的兔BMSCs體外培養(yǎng)體系,并探討其成骨分化及骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)的蛋白表達(dá)受傳統(tǒng)中藥三七總皂苷(Panax notoginseng saponin,PNS)的影響。2.研究PNS對BMP-Smad經(jīng)典信號通路的影響,并在此基礎(chǔ)上探討PNS促進(jìn)BMSCs成骨分化的作用機(jī)制。方法:1.BMSCs體外分離培養(yǎng)、鑒定及成骨能力檢測的研究:嚴(yán)格無菌操作下,剝離獲取新生新西蘭大白兔四肢長骨,然后用含胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)和雙抗的DMEM沖洗骨髓腔,通過密度梯度離心法、全骨髓貼壁法獲取BMSCs后:(1)通過倒置顯微鏡下觀察BMSCs的形態(tài)學(xué)特點;(2)通過流式細(xì)胞術(shù)檢測BMSCs的表面標(biāo)志抗原;(3)通過茜素紅染色檢測細(xì)胞內(nèi)鈣結(jié)節(jié)的形成情況,鑒定兔BMSCs的成骨分化能力。2.PNS對兔BMSCs成骨分化及BMP2蛋白表達(dá)的影響:在課題組前期研究的基礎(chǔ)上,選用最適濃度(1...

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1體外剝離幼兔長骨Figure1-1Isolationofyoungrabbitlongbonesinvitro

過全骨髓貼壁法及密度梯度離心法正確分離兔BMSCs，初步建立穩(wěn)MSCs原代培養(yǎng)體系，掌握BMSCs在體外狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)及生長后續(xù)實驗提供正常充足的細(xì)胞。骨髓貼壁法1）處死：挑選健康的年齡一周以內(nèi)的新西蘭大白兔的幼兔一只，其放置于75%的酒精中，要求酒精沒過幼兔表面，浸....

圖1-2沖洗骨髓腔獲取BMSCsFigure1-2RinsethebonemarrowcavitytoobtainBMSCs

洗骨髓腔：將放置于含有雙抗的PBS緩沖液內(nèi)沖洗，將骨頭表面殘留的少許雙抗盡量沖離骨皿內(nèi)加入適量的10%FBS培養(yǎng)基，剪刀剪去器在培養(yǎng)皿內(nèi)抽取FBS培養(yǎng)基，沖洗骨髓腔液流入原培養(yǎng)皿內(nèi)，然后將沖洗液過濾到新的l注射器收集濾液至10ml離心管內(nèi)。心、重懸、種瓶：室溫下....

圖1-3密度梯度離心法分離細(xì)胞Figure1-3Separationofcellsbydensitygradientcentrifugation

2000r/min，室溫下，離心30分鐘，離下分為四層，最上層呈紅色，為稀釋液層，第層，第三層呈透明狀，為分離液層，最下層為取第二層的乳白色淋巴細(xì)胞層至另外一個干凈內(nèi)加入10ml的細(xì)胞洗滌液，1000r/min，室溫，小心加入5ml的PBS緩沖液重懸，然后1....

圖1-4原代兔BMSCs培養(yǎng)3天（100×）

d信號通路調(diào)控BMSCs成骨分化的機(jī)制研究兔BMSCs形態(tài)學(xué)特征觀察分別使用全骨髓貼壁法與密度梯度離心法分離培梯度離心法分離培養(yǎng)得到的兔BMSCs中血細(xì)胞者在細(xì)胞數(shù)量上差別并不大，傳代后細(xì)胞在體異也不大。在倒置相差顯微鏡下觀察，剛分離大小不等的圓形或卵圓形細(xì)胞在培....

本文編號：3963585