本文關(guān)鍵詞：Nrf2對(duì)小鼠脊髓損傷后膠質(zhì)瘢痕形成的影響及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景脊髓損傷是一種合并全身感覺、運(yùn)動(dòng)功能障礙等后遺癥的嚴(yán)重?fù)p傷。隨著現(xiàn)代社會(huì)交通和建筑業(yè)的發(fā)展,該病發(fā)病率也不斷升高。嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙后遺癥導(dǎo)致患者正常生活難以自理,在精神及經(jīng)濟(jì)上給家庭和社會(huì)造成了損失。當(dāng)前醫(yī)療手段對(duì)脊髓損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)尚沒有較理想的效果。膠質(zhì)瘢痕是影響脊髓損傷后神經(jīng)軸突再生和功能恢復(fù)的重要因素。目前常見的抑制膠質(zhì)瘢痕形成的方法有:抑制SCI后星形膠質(zhì)細(xì)胞分裂增殖;采用藥物裂解CSPG;抑制CSPG表達(dá);基因技術(shù)封閉GFAP、Vim表達(dá);X線放射治療抑制膠質(zhì)瘢痕;抑制SCI后炎癥反應(yīng);手術(shù)切除膠質(zhì)瘢痕等。轉(zhuǎn)錄因子Nrf2在多種疾病模型中可抑制炎癥反應(yīng),如自身免疫疾病、哮喘、肺氣腫、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)腸炎、動(dòng)脈粥樣硬化等。NF-κb是調(diào)控炎癥反應(yīng)的主要轉(zhuǎn)錄因子。Nrf2主要通過抑制NF-κb活性,降低各種前炎癥介質(zhì)如基質(zhì)金屬蛋白酶、炎癥趨化因子、細(xì)胞粘附分子等表達(dá)發(fā)揮抗炎作用。Nrf2在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中也有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用,其激活后可在神經(jīng)退行性疾病、腦缺血梗死、腦出血、顱腦創(chuàng)傷等疾病中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。因此我們推測(cè),Nrf2可能通過調(diào)控NF-κb信號(hào)通路抑制SCI后炎癥反應(yīng)而抑制膠質(zhì)瘢痕形成,為此我們?cè)O(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn)研究。目的在實(shí)驗(yàn)中,我們選用ICR小鼠(Nrf2+/+、Nrf2-/-),建立小鼠脊髓損傷模型,通過采用Nrf2激活劑SFN和基因敲除對(duì)Nrf2進(jìn)行正反向調(diào)控,觀測(cè)Nrf2在SCI中對(duì)NF-κb信號(hào)通路、膠質(zhì)瘢痕形成、神經(jīng)功能恢復(fù)的影響,探討Nrf2對(duì)SCI后膠質(zhì)瘢痕形成的影響及作用機(jī)制。方法選用ICR小鼠(Nrf2+/+、Nrf2-/-),建立小鼠脊髓損傷模型,給予Nrf2激活劑SFN干預(yù),給藥方法:將SFN以玉米油稀釋,建模后即給藥,腹腔注射,5mg/kg/d,共累計(jì)7次給藥,溶劑對(duì)照組等體積玉米油腹腔注射。設(shè)計(jì)6個(gè)實(shí)驗(yàn)分組,分別為野生型假手術(shù)組、野生型單純損傷組、野生型溶劑干預(yù)組(等體積玉米油腹腔注射)、野生型SFN干預(yù)組(5mg/kg/d,腹腔注射)、Nrf2敲除假手術(shù)組、Nrf2敲除損傷組。術(shù)后1d、7 d、14 d、21 d、28 d對(duì)各組小鼠進(jìn)行BMS評(píng)分;術(shù)后7d行免疫熒光雙標(biāo)染色(GFAP+Nrf2、GFAP+Vim、GFAP+P65、GFAP+CSPG)觀察脊髓組織病理變化;術(shù)后7d WB檢測(cè)各組Nrf2、P65、p-IκBα、GFAP、Vim、CSPG蛋白表達(dá)情況,ELISA檢測(cè)TNF-α、IL-1β蛋白表達(dá)情況,Real-time PCR檢測(cè)TNF-α、IL-1βm RNA相對(duì)含量;術(shù)后28d WB檢測(cè)GFAP、CSPG、GAP-43蛋白表達(dá)情況。結(jié)果行為學(xué):假手術(shù)組BMS評(píng)分均為9分,各脊髓損傷組術(shù)后后肢運(yùn)動(dòng)功能均有不同程度恢復(fù),術(shù)后28d時(shí)單純損傷組評(píng)分為2.17±0.41分,玉米油組2.33±0.52分,SFN組3.33±0.52分,Nrf2敲除損傷組1.50±0.54分,SFN組功能恢復(fù)情況最好,玉米油組與單純損傷組次之,而Nrf2敲除損傷組恢復(fù)情況最差,玉米油組與單純損傷組之間無顯著差異,其余各組之間比較差異明顯(P0.05)。免疫熒光染色:術(shù)后7d,SFN組與單純損傷組相比,Nrf2核移位增加,P65核移位減少,同時(shí)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化水平降低,GFAP、Vim、CSPG染色較弱;Nrf2敲除損傷組與單純損傷組相比,Nrf2染色不明顯,P65核移位增加,星形膠質(zhì)細(xì)胞活化水平明顯增強(qiáng),GFAP、Vim、CSPG染色增強(qiáng);單純損傷組與玉米油組無明顯差異。WB檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)情況:術(shù)后7d,SFN組與單純損傷組相比,Nrf2(核蛋白)表達(dá)增加,P65(核蛋白)降低,p-IκBα、GFAP、Vim、CSPG降低;Nrf2敲除損傷組與單純損傷組相比,P65(核蛋白)增加,p-IκBα、GFAP、Vim、CSPG增加;術(shù)后28d,SFN組與單純損傷組相比,GFAP、CSPG降低,GAP-43增加,Nrf2敲除損傷組與單純損傷組相比,GFAP、CSPG增加,GAP-43降低;單純損傷組與玉米油組無明顯差異。ELISA檢測(cè)TNF-α、IL-1β蛋白表達(dá)情況:術(shù)后7d,SFN組與單純損傷組相比,TNF-α、IL-1β蛋白表達(dá)降低,Nrf2敲除損傷組與單純損傷組相比,TNF-α、IL-1β蛋白表達(dá)增加;單純損傷組與玉米油組無明顯差異。RT-PCR檢測(cè)TNF-α、IL-1βm RNA相對(duì)含量:術(shù)后7d,SFN組與單純損傷組相比,TNF-α、IL-1βm RNA表達(dá)降低,Nrf2敲除損傷組與單純損傷組相比,TNF-α、IL-1βm RNA表達(dá)增加;單純損傷組與玉米油組無明顯差異。結(jié)論Nrf2可通過抑制NF-κb信號(hào)通路減少炎癥因子釋放,減輕炎癥反應(yīng),抑制脊髓損傷后GFAP、Vim、CSPG表達(dá),減輕膠質(zhì)瘢痕形成,上調(diào)GAP-43表達(dá),提高軸突再生能力,促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：脊髓損傷 膠質(zhì)瘢痕 核因子E2相關(guān)因子2 核因子-κB 腫瘤壞死因子-α 白細(xì)胞介素-1β 小鼠
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R651.2
【目錄】：

• 英文縮寫詞一覽表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-12
• 1. 前言12-14
• 2. 材料與方法14-26
• 3. 結(jié)果26-38
• 4. 討論38-44
• 全文總結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 文獻(xiàn)綜述 Nrf2在中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷研究進(jìn)展50-61
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果61-62
• 致謝62

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