目的:觀察褪黑素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖和遷移影響,并探討PKA通路與Src通路介導(dǎo)CREB依賴性基因轉(zhuǎn)錄在上述調(diào)控過程中的作用。研究方法:對(duì)MG-63骨肉瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),應(yīng)用不同濃度的褪黑素對(duì)其作用24小時(shí)后進(jìn)行Transwell實(shí)驗(yàn)、Celigo劃痕實(shí)驗(yàn)和CCK-8實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證褪黑素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖和遷移能力的影響;應(yīng)用最適4m M的濃度的褪黑素、H89對(duì)其作用24小時(shí)后進(jìn)行western blot實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)p-ERK1/2/p-p90RSK/p-CREB途徑磷酸化的表達(dá)水平來驗(yàn)證PKA與CREB依賴通路的聯(lián)系;應(yīng)用4m M的褪黑素、PP2對(duì)其作用24小時(shí)后進(jìn)行western blot實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)p-ERK1/2/p-CREB途徑磷酸化的表達(dá)水平來驗(yàn)證Src與CREB依賴通路的聯(lián)系;應(yīng)用4m M的褪黑素、PP2對(duì)其作用24小時(shí)后進(jìn)行western blot實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)c AMP的表達(dá)水平來驗(yàn)證c AMP-PKA與Src通路的關(guān)系。結(jié)果:(1)不同濃度褪黑素處理組中與對(duì)照組相比骨肉瘤細(xì)胞增殖均有減少;相比對(duì)照組,不同濃度褪黑素處理組Transwell轉(zhuǎn)移率經(jīng)T-test分析P<0.05;48...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 研究對(duì)象
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要耗材
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        2.2.2 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 熒光酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.2.4 RT-PCR
        2.2.5 蛋白質(zhì)免疫印跡
        2.2.6 cAMP水平的量化
        2.2.7 細(xì)胞Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 Celigo劃痕實(shí)驗(yàn)
    2.3 統(tǒng)計(jì)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 褪黑素對(duì)CREB磷酸化和轉(zhuǎn)錄活性的影響
    3.2 PKA與 CREB依賴通路的聯(lián)系
    3.3 Src與 CREB依賴通路的聯(lián)系
    3.4 c AMP-PKA與 Src通路的連接
    3.5 褪黑素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的遷移能力的影響
        3.5.1 細(xì)胞Transwell實(shí)驗(yàn)
        3.5.2 Celigo劃痕檢測(cè)細(xì)胞遷移能力
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3829866