本文關(guān)鍵詞：脂肪干細胞膜片結(jié)合POC-PLA電紡絲補片修復(fù)兔全層胸壁缺損的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的:完整的胸壁構(gòu)成對胸腔重要結(jié)構(gòu)的保護,同時在呼吸運動中起重要作用。各種原因?qū)е碌拇竺娣e的全層胸壁缺損重建,一直是整形外科、心胸外科尚未完全解決的難題。對于大面積胸壁缺損的修復(fù),現(xiàn)今可選擇的修復(fù)材料不斷推陳出新,醫(yī)生可以根據(jù)自己的經(jīng)驗結(jié)合臨床病人的需要選擇合適的材料進行修復(fù)。皮膚與軟組織的填充主要就是依靠局部和游離的皮瓣以及肌皮瓣。目前用于骨性重建常見的材料包括:自體骨、鈦、組織工程骨等。大面積的胸壁缺損,通常需要考慮用補片來封閉胸腔。選擇合適的修復(fù)材料是胸壁重建術(shù)后恢復(fù)的關(guān)鍵要素。脂肪干細胞(Adipose stem cells,ASCs)是成體間充質(zhì)干細胞的一種,從脂肪之中獲取。它具有向三個胚層分化的能力,可在不同的誘導(dǎo)因子作用下分化為多種細胞,同時可以分泌多種細胞因子。脂肪干細胞可以通過多種機制加快創(chuàng)面的愈合,包括旁分泌作用、多向分化能力、促進血管新生等。聚檸檬酸酯(POLY 1,8-Octanediol-Co-Citric Acid,POC)材料是近幾年發(fā)現(xiàn)的一種生物彈性材料,具有良好的生物相容性和可控的力學(xué)效應(yīng),POC合成過程中對環(huán)境的要求不高,甚至在37℃,就可以合成,這使得POC材料可以和藥物或者蛋白結(jié)合成為復(fù)合體,是一種理想的組織工程修復(fù)材料。本實驗采用了彈性體POC材料為主體,加入等比例的聚乳酸(Polylactic Acid,PLA),通過靜電紡絲技術(shù)共紡出具有3D納米孔隙結(jié)構(gòu)的補片,同時使用干細胞膜片技術(shù)減少補片帶來的胸膜粘連,促進胸壁的重構(gòu)。本課題主要研究了以下內(nèi)容:第一部分兔脂肪干細胞分離與鑒定實驗方法:選取雌性新西蘭兔,重約2-2.5kg,經(jīng)耳緣靜脈注射麻醉后,取頸背部脂肪團塊,將脂肪團塊剪碎后加入等體積I型膠原酶消化離心分離。分離獲得的rASCs使用倒置顯微鏡觀察其大體形態(tài);流式細胞技術(shù)檢測CD29、CD44、CD90、CD31和CD45等細胞表面標志物;MTT法和細胞計數(shù)法測量干細胞增值曲線;將rACSs向成骨、成軟骨、成脂誘導(dǎo)分化,并分別進行茜素紅、阿辛藍、油紅O等特異性染色。實驗結(jié)果:前三代rASCs有較高的純度和活性,可以作為種子細胞進行組織工程實驗。第二部分rASCs膜片結(jié)合POC-PLA電紡絲補片復(fù)合體的建立與材料安全性檢測實驗方法:按摩爾比1:1將檸檬酸和1,8-辛二醇制備成POC預(yù)聚體,以三氟乙醇為溶劑,按質(zhì)量比1:1的配比配制POC預(yù)聚體與PLA的溶液,電紡后固化獲得補片,使用溫敏培養(yǎng)皿將rASCs膜片轉(zhuǎn)移至補片表面形成復(fù)合補片。掃描電鏡分別檢測材料微觀形態(tài)、三維孔隙結(jié)構(gòu),以及干細胞的粘附情況。材料性能分別進行以下實驗進行檢測:力學(xué)性能檢測;PBS培養(yǎng)檢測降解率;細胞混合培養(yǎng)檢測細胞增值、粘附性能及細胞毒性;大鼠腹壁皮下植入,觀察局部炎癥反應(yīng),檢測組織相容性。實驗結(jié)果:POC-PLA沒有細胞毒性,在體內(nèi)無明顯炎癥反應(yīng),ASCs能沿著材料均勻生長,是一種很有前景的生物材料。第三部分rASCs膜片結(jié)合POC-PLA電紡絲補片復(fù)合體修復(fù)兔全層胸壁缺損的研究實驗方法:選取健康新西蘭兔65只,隨機分成A組、B組、C組、D組、E組五組,A組為ePTFE補片修復(fù)組,B組為單純皮瓣修復(fù)組,C組為POC+PLA補片修復(fù)組,D組為細胞膜片復(fù)合POC+PLA補片修復(fù)組、E組假手術(shù)組。各組術(shù)后觀察胸壁平片、肺功能,分別于術(shù)后4周、12周、24周取組織樣本,并觀測胸膜粘連情況,樣本進行組織學(xué)檢測與CD31免疫組化檢測、western blot檢測VEGF,Collagen I。實驗結(jié)果:POC-PLA膜片可作為可降解補片用于組織工程胸壁的修復(fù)。(2)ASCs能減輕POC-PLA膜片在胸壁重建中與肺臟的粘連。(3)結(jié)合ASCs的POC-PLA補片用于胸壁重建術(shù)后肺功能良好,并減少胸膜粘連等并發(fā)癥產(chǎn)生,是一種很有前景的材料。
【關(guān)鍵詞】：胸壁重建 組織工程 電紡絲補片 脂肪干細胞
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R655.1
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 縮略詞表11-13
• 前言13-15
• 第一部分 兔脂肪干細胞分離與鑒定15-30
• 一、實驗材料15-18
• 二、實驗方法18-22
• 三、結(jié)果22-28
• 四、討論28-30
• 第二部分 rASCs膜片結(jié)合POC-PLA電紡絲補片復(fù)合體的建立與材料安全性檢測30-44
• 一、實驗材料30-31
• 二、實驗方法31-36
• 三、結(jié)果36-42
• 四、討論42-44
• 第三部分 rASCs膜片結(jié)合POC-PLA電紡絲補片復(fù)合體修復(fù)兔全層胸壁缺損的研究44-70
• 一、實驗材料44-45
• 二、實驗方法45-50
• 三、結(jié)果50-68
• 四、討論68-70
• 全文總結(jié)70-71
• 參考文獻71-77
• 綜述 大面積胸壁缺損的修復(fù)進展77-92
• 參考文獻86-92
• 附錄92-93
• 致謝93-94

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  本文關(guān)鍵詞：脂肪干細胞膜片結(jié)合POC-PLA電紡絲補片修復(fù)兔全層胸壁缺損的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：376171