本文關(guān)鍵詞：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合殼聚糖水凝膠修復(fù)兔半月板缺損的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：在臨床中,半月板損傷后往往難以自我修復(fù),且無較好的手術(shù)修復(fù)方式,而傳統(tǒng)的半月板切除容易造成膝關(guān)節(jié)不穩(wěn),加快關(guān)節(jié)軟骨退變等嚴(yán)重后果。而使用組織工程的方法來重建缺損的半月板是一種較為可行的研究方向。目的：探究利用CS/beta-Gp溫敏水凝膠復(fù)合SMSC構(gòu)建的可注射型組織工程纖維軟骨在兔半月板缺損模型中應(yīng)用的可行性。方法：在動物手術(shù)室獲取健康新西蘭大白兔膝關(guān)節(jié)滑膜,轉(zhuǎn)運至超凈臺中,進(jìn)行仔細(xì)消化分離出SMSC;并通過有限稀釋法進(jìn)行純化后,在體外培養(yǎng)擴增SMSC,在一定條件下進(jìn)行成骨、成脂、成軟骨的多向分化能力鑒定;為使SMSC能在體內(nèi)長時間的表達(dá)向軟骨分化的關(guān)節(jié)細(xì)胞因子,利用慢病毒將TGF-β3與BMP-2基因共同轉(zhuǎn)入兔SMSC內(nèi),使其長期穩(wěn)定表達(dá)TGF-β3/BMP-2;最后,在體外合成CS/beta-Gp水凝膠后與穩(wěn)定表達(dá)TGF-β3/BMP-2的SMSC進(jìn)行混合,并注射入兔半月板缺損處,手術(shù)后飼養(yǎng)分別6、12周,最后采用過量麻醉法處死,并取出新生成的修復(fù)組織,通過大體觀察以及病理染色的方法判斷修復(fù)情況,其中病理染色包括HE染色、甲苯胺藍(lán)染色、Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原免疫組化染色等。結(jié)果：培養(yǎng)獲得的SMSC,形態(tài)均一,呈平形狀或漩渦形分布,并在一定誘導(dǎo)條件下,可向成骨、成脂、成軟骨等不同方向分化。慢病毒轉(zhuǎn)染SMSC后,隨著時間延長,綠色熒光逐漸增加,轉(zhuǎn)染96小時后,可見明顯綠色熒光,轉(zhuǎn)染率約100%。通過Real-time PCR檢測SMSC上游基因表達(dá),Western blot檢測蛋白表達(dá),與對照組相比,經(jīng)轉(zhuǎn)染的SMSC能穩(wěn)定的表達(dá)TGF-β3與BMP-2；在體外將殼聚糖溶液與β-磷酸甘油鈉進(jìn)行預(yù)混合后,成功獲得了CS/beta-Gp溫敏水凝膠,在室溫下為液態(tài),在37℃下10分鐘即可轉(zhuǎn)變?yōu)楣虘B(tài)。在體外將CS/beta-Gp溫敏水凝膠-與SMSC進(jìn)行預(yù)混合之后注入兔膝關(guān)節(jié)半月板內(nèi),術(shù)后籠中飼養(yǎng),雙下肢不制動。在術(shù)后6周、12周后取標(biāo)本進(jìn)行病理染色,其中,甲苯胺藍(lán)染色可見新生的組織中有藍(lán)色異染為軟骨細(xì)胞特有的細(xì)胞外基質(zhì),免疫組化染色可見明顯的Ⅰ型膠原與Ⅱ型膠原強陽性表達(dá)。結(jié)論：結(jié)果表明利用慢病毒將TGF-β3與BMP-2基因共同轉(zhuǎn)入SMSC后,使其穩(wěn)定表達(dá)TGF-β3與BMP-2,并利用CS/beta-Gp溫敏水凝膠為支架,進(jìn)行修復(fù)兔半月板缺損的方法較為可行并能夠在一定程度上修復(fù)半月板缺損。
【關(guān)鍵詞】：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞 殼聚糖 半月板 組織工程
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R684
【目錄】：

• 表格1 中英文縮寫對照表5-6
• 摘要6-7
• abstract7-9
• 前言9-12
• 研究背景9-10
• 課題設(shè)計10
• 參考文獻(xiàn)10-12
• 第一部分：SMSC的獲取與培養(yǎng)12-18
• 前言12
• 材料與方法12-14
• 結(jié)果14-15
• 討論15-16
• 結(jié)論16
• 參考文獻(xiàn)16-18
• 第二部分：慢病毒轉(zhuǎn)染SMSC18-27
• 前言18
• 材料和方法18-20
• 結(jié)果20-24
• 討論24
• 結(jié)論24
• 參考文獻(xiàn)24-27
• 第三部分、經(jīng)轉(zhuǎn)染的SMSC復(fù)合殼聚糖水凝膠修復(fù)兔半月板缺損27-35
• 前言27
• 材料與方法27-29
• 結(jié)果29-32
• 討論32-33
• 結(jié)論33
• 參考文獻(xiàn)33-35
• 綜述35-42
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 作者簡介42-43
• 撰寫論文情況43-44
• 致謝44-47

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 崔一民,曹誼林,商慶新,崔磊,劉偉;自體組織工程化纖維軟骨修復(fù)半月板缺損的實驗研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2002年03期

2 趙貴慶;王志軍;張晨;王潔晴;楊檸澤;尹爍;崔磊;曹誼林;;應(yīng)用犬真皮成纖維細(xì)胞構(gòu)建組織工程半月板修復(fù)犬半月板缺損的實驗研究[J];組織工程與重建外科雜志;2013年02期

3 張業(yè)鋒;孫磊;;成型脫鈣骨基質(zhì)移植重建完全半月板缺損的實驗研究[J];中國矯形外科雜志;2006年14期

4 ;[J];;年期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 符培亮;自體滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞—小腸粘膜下層復(fù)合物修復(fù)兔半月板損傷的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐敬;滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合殼聚糖水凝膠修復(fù)兔半月板缺損的實驗研究[D];南京大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合殼聚糖水凝膠修復(fù)兔半月板缺損的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：374347