研究背景及意義:乳腺癌是女性高發(fā)腫瘤之一,研究表明乳腺癌的發(fā)病與膽固醇代謝異常相關(guān)。27-羥膽固醇(27-HC)是膽固醇的代謝產(chǎn)物,是機體中雌激素受體(ER)的內(nèi)源性調(diào)節(jié)因子,具有促進ER陽性乳腺癌細(xì)胞生長的作用。臨床數(shù)據(jù)顯示,乳腺腫瘤樣本中27-HC含量顯著上升。TCGA數(shù)據(jù)庫腫瘤樣本以及多種人乳腺癌細(xì)胞系表達譜分析發(fā)現(xiàn),乳腺癌組織27-HC降解酶CYP7B1(氧甾酮7α-羥化酶)的表達顯著低于正常乳腺組織。有研究表明,乳腺癌組織27-HC的升高與患者循環(huán)血液的27-HC濃度無明顯相關(guān)性,提示腫瘤組織27-HC的升高可能由腫瘤組織局部膽固醇代謝引起。此外,也有研究顯示,乳腺癌組織富含巨噬細(xì)胞,并對癌細(xì)胞的生長及遷移具有明顯的促進作用。因此,深入探討乳腺癌組織27-HC的來源、病理生理學(xué)作用以及調(diào)控機制對乳腺癌的防治具有重要意義。研究策略與方法:1.乳腺癌細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞CYP27A1表達以及27-HC分泌的檢測:1)采用Western blot檢測人ER陽性乳腺癌MCF-7細(xì)胞、ER陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞以及人單核THP-1細(xì)胞的CYP27A1和CYP7B1的表達水平...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 前言
第2章 單核/巨噬細(xì)胞CYP27A1的表達顯著高于乳腺癌細(xì)胞
    2.1 實驗?zāi)康?br>    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 細(xì)胞增殖實驗
        2.2.3 CCK-8檢測細(xì)胞活力
        2.2.4 蛋白提取及定量
        2.2.5 Western blot
        2.2.6 細(xì)胞免疫熒光
        2.2.7 ELISA檢測
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 單核細(xì)胞高表達蛋白CYP27A1
        2.3.2 THP-1 與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后顯著增加CYP27A1 的表達
        2.3.3 27-HC對MCF-7細(xì)胞增殖的影響
第3章 乳腺癌細(xì)胞CYP7B1基因呈現(xiàn)高甲基化狀態(tài)
    3.1 實驗?zāi)康?br>    3.2 材料與方法
    3.3 實驗結(jié)果
第4章 腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)單核細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞分化
    4.1 實驗?zāi)康?br>    4.2 材料與方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 RNA的提取、逆轉(zhuǎn)錄以及Q-PCR
        4.2.3 流式分析
        4.2.4 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞提取
        4.2.5 小鼠骨髓細(xì)胞提取
        4.2.6 骨髓細(xì)胞的分化
        4.2.7 細(xì)胞HE染色
        4.2.8 電鏡觀察外泌體形態(tài)
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 乳腺細(xì)胞上清誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化
        4.3.2 小鼠乳腺癌細(xì)胞4T1上清誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞分化
        4.3.3 不同類型巨噬細(xì)胞分泌27-HC的能力比較
        4.3.4 腫瘤細(xì)胞外泌體誘導(dǎo)單核/巨噬細(xì)胞分化
第5章 27-HC促進單核細(xì)胞的聚集
    5.1 實驗?zāi)康?br>    5.2 材料與方法
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 27-HC對巨噬細(xì)胞增殖沒有影響
        5.3.2 27-HC促進巨噬細(xì)胞分泌趨化因子
第6章 乳腺腫瘤組織中27-HC的濃度與浸潤的巨噬細(xì)胞數(shù)量正相關(guān)
    6.1 實驗?zāi)康?br>    6.2 材料與方法
        6.2.1 4T1小鼠腫瘤模型建立
        6.2.2 小鼠血常規(guī)檢測
        6.2.3 組織切片HE染色
        6.2.4 組織切片免疫組化
        6.2.5 27-HC濃度測定
    6.3 實驗結(jié)果
        6.3.1 荷瘤鼠表現(xiàn)出全身炎癥特點
        6.3.2 腫瘤27-HC含量與浸潤的巨噬細(xì)胞數(shù)量正相關(guān)
第7章 不同來源巨噬細(xì)胞對4T1腫瘤轉(zhuǎn)錄組基因表達的影響
    7.1 實驗?zāi)康?br>    7.2 材料與方法
        7.2.1 BGISEQ-500 RNA-seq測序
        7.2.2 Q-PCR驗證
    7.3 實驗結(jié)果
第8章 全文總結(jié)
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：3754614