目的:胸腹主動脈手術常發(fā)生脊髓缺血再灌注損傷(Spinal Cord Ischemia Reperfusion Injury,SCIRI),可導致損傷平面以下感覺和運動缺失,常見的并發(fā)癥是膀胱、腸道和生殖器官功能障礙及截癱等。盡管外科不斷改進手術方法,SCIRI依然未得到完全控制。SCIRI相關的分子機制尚未明確,其中TLR4介導的NF-κB炎癥信號通路是其重要機制。蛋白TRIL(TLR4 interactor with leucine-rich repeats,TRIL)和MTDH(metadherin,MTDH)在NF-κB炎癥通路中發(fā)揮重要作用,近年來,miRNA中miR-29家族和LncRNA TUG1在神經和缺血疾病方面得到關注,本研究擬在現有的炎癥通路的基礎上,探索SCIRI中TUG1和miR-29b-1-5p對下游炎癥蛋白的調控機制。研究方法:通過在主動脈弓處的左頸總動脈和左鎖骨下動脈之間夾閉14min后開放,建立大鼠脊髓缺血再灌注模型。隨機分為IR組(缺血組)和Sham組(假手術組,不夾閉主動脈弓),通過microarray芯片對IR后異常表達的脊髓miRNA進行分析,...

【文章頁數】：94 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:大鼠脊髓缺血再灌注損傷后miR-29b-1-5p對脊髓功能及TRIL和MTDH蛋白表達的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對象和方法
            2.2.1 研究對象
            2.2.2 實驗分組
            2.2.3 動物手術模型建立
            2.2.4 鞘內注射
            2.2.5 行為學檢測
            2.2.6 組織學制備
            2.2.7 Real-time PCR檢測miR-29b-1-5p的表達水平
            2.2.8 Western Blot印跡檢測大鼠脊髓TRIL,MTDH,TLR4,NF-κB和 IL-1β蛋白表達
            2.2.9 伊文思藍測定BSCB完整性
            2.2.10 雙熒光素酶報告基因測定miR-29b-1-5p和 TRIL和 MTDH的結合
        2.3 統計學處理
    3 結果
        3.1 缺血再灌注損傷后各時間點脊髓組織miR-29b-1-5p的表達
        3.2 干預miR-29b-1-5p對缺血再灌注損傷后脊髓功能的影響
            3.2.1 miR-29b-1-5p對大鼠脊髓缺血再灌注損傷后的下肢功能評分影響
            3.2.2 miR-29b-1-5p對大鼠脊髓BSCB通透性影響
        3.3 缺血再灌注損傷后脊髓組織TRIL和 MTDH的蛋白表達及和下游炎癥通路的關系
            3.3.1 缺血再灌注損傷后脊髓組織TRIL和 MTDH的蛋白表達
            3.3.2 沉默TRIL和 MTDH降低缺血再灌注損傷后下游炎癥蛋白的表達
        3.4 miR-29b-1-5p與 TRIL和 MTDH的調控關系
            3.4.1 干預miR-29b-1-5p對缺血再灌注損傷后TRIL和 MTDH的蛋白表達影響
            3.4.2 miR-29b-1-5p和TRIL及MTDH的雙熒光素酶報告基因檢測
    4 討論
    5 結論
第二部分:大鼠脊髓缺血再灌注損傷后TUG1對脊髓功能及miR-29b-1-5p表達的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對象和方法
            2.2.1 研究對象
            2.2.2 實驗分組
            2.2.3 動物手術模型建立
            2.2.4 鞘內注射
            2.2.5 行為學檢測
            2.2.6 組織學制備
            2.2.7 Real-time PCR檢測和TUG1和miR-29b-1-5p的表達水平
            2.2.8 伊文思藍測定BSCB完整性
            2.2.9 雙熒光素酶報告基因測定TUG1和miR-29b-1-5p的結合
        2.3 統計學處理
    3 結果
        3.1 缺血再灌注損傷后各時間點脊髓組織TUG1的表達
        3.2 沉默TUG1對缺血再灌注損傷后脊髓功能的影響
            3.2.1 沉默TUG1對大鼠脊髓缺血再灌注損傷后的下肢功能評分影響
            3.2.2 沉默TUG1對大鼠脊髓缺血再灌注損傷后BSCB通透性影響
        3.3 TUG1在脊髓缺血再灌注損傷中對miR-29b-1-5p的調控關系
            3.3.1 沉默TUG1對大鼠脊髓缺血再灌注損傷后miR-29b-1-5p的表達影響
            3.3.2 TUG1和miR-29b-1-5p的雙熒光素酶報告基因檢測
    4 討論
    5 結論
第三部分:TUG1通過miR-29b-1-5p調控MTDH影響大鼠脊髓缺血再灌注損傷后脊髓功能和炎癥通路
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對象和方法
            2.2.1 研究對象
            2.2.2 實驗分組
            2.2.3 動物手術模型建立
            2.2.4 鞘內注射
            2.2.5 行為學檢測
            2.2.6 組織學制備
            2.2.7 Western Blot印跡檢測大鼠脊髓TRIL,MTDH,TLR4,NF-κB和IL-1β蛋白表達
            2.2.8 伊文思藍測定BSCB完整性
            2.2.9 免疫熒光染色
        2.3 統計學處理
    3 結果
        3.1 沉默TUG1后抑制miR-29b-1-5p對缺血再灌注損傷后脊髓功能影響
            3.1.1 沉默TUG1后抑制miR-29b-1-5p對缺血再灌注損傷后下肢功能評分的影響
            3.2.2 沉默TUG1后抑制miR-29b-1-5p對大鼠脊髓BSCB通透性影響
        3.2 沉默TUG1后抑制miR-29b-1-5p對缺血再灌注損傷后MTDH和炎癥蛋白表達的影響
        3.3 沉默TUG1后過表達TRIL對缺血再灌注損傷后TLR4 和炎癥蛋白表達的影響
    4 討論
    5 結論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述 非編碼RNA在中樞神經系統缺血再灌注損傷的研究進展
    參考文獻
攻讀學位期間取得的科研成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3754669