骨骼肌萎縮主要表現(xiàn)為肌纖維進(jìn)行性縮小甚至消失,肌肉質(zhì)量和容積變小。引起肌肉萎縮的原因復(fù)雜,包括蛋白質(zhì)合成與降解失調(diào)、慢性炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等多方面原因。肌細(xì)胞中線粒體含量豐富,承擔(dān)著調(diào)節(jié)肌肉細(xì)胞的能量供應(yīng)、活性氧（ROS）穩(wěn)態(tài)、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等多種使命。已經(jīng)發(fā)現(xiàn),老年大鼠骨骼肌中的亞肌膜下（SS）、肌原纖維間（IMF）線粒體數(shù)量都趨于減少。因此,在骨骼肌衰老過(guò)程中線粒體功能的作用引起了人們的關(guān)注。MuRF1（Trim63）和MAFbx（atrogin-1）是兩種重要的骨骼肌特異性E3連接酶,被認(rèn)為是骨骼肌萎縮的標(biāo)志物。骨骼肌萎縮時(shí),MuRF1和MAFbx顯著激活,促進(jìn)底物蛋白的泛素化,從而使更多蛋白被轉(zhuǎn)運(yùn)到蛋白酶體中降解。當(dāng)被抑制時(shí)可以減輕肌肉丟失,因此,二者的表達(dá)被認(rèn)為可能與肌肉萎縮程度呈正相關(guān)。Omi/HtrA2是線粒體膜間隙上的一種絲氨酸蛋白酶,也是一種具有熱休克蛋白性質(zhì)的分子伴侶,其在線粒體質(zhì)量控制和維持線粒體內(nèi)穩(wěn)態(tài)中起到重要的作用。Omi/HtrA2基因純合子缺失鼠（-/-）(又被稱之為HtrA2^mnd2小鼠)是利用基因敲除技術(shù)錯(cuò)義突變Omi/HtrA2基... 

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HtrA2mnd2小鼠骨骼肌HE染色（縱向切面）

Omi/HtrA2 基因雜合子小鼠（+/-）34.34 34.54 34.74 34.54 23.27 0.14HtrA2mnd2小鼠（-/-）29.67 29.80 30.59 30.02 21.88 1.23表 3.2 實(shí)時(shí)定量 PCR 測(cè)定 MuRF1 基因擴(kuò)增 Ct 值目的基因 Ct 值 內(nèi)參基因 基因表達(dá)差異Ct-1 Ct-2 Ct-3 Ct 平均值18s RNACt 平均值2-ΔΔCt野生型小鼠（+/+）33.38 36.64 35.02 35.01 25.77 1Omi/HtrA2 基因雜合子小鼠（+/-）38.77 38.75 38.79 38.77 23.27 0.01HtrA2mnd2小鼠（-/-）30.58 30.03 30.29 30.30 21.88 1.77A B

圖 3.3 HtrA2mnd2小鼠骨骼肌線粒體細(xì)胞周期相關(guān)基因表達(dá)A：骨骼肌中 Asns 表達(dá)變化 B：骨骼肌中 Trib3 表達(dá)變化（*P<0.05，**P<0.01）3.4 HtrA2mnd2小鼠骨骼肌線粒體生物合成基因PGC-1α的表達(dá)水平實(shí)時(shí)定量 PCR 方法檢測(cè)小鼠骨骼肌的線粒體生物合成相關(guān)基因的表達(dá)變化。結(jié)果表明：與野生型小鼠（+/+）相比，HtrA2mnd2小鼠（-/-）和 Omi/HtrA2基因雜合子小鼠（+/-）的骨骼肌組織中線粒體生物合成基因 PGC-1α的 mRNA水平均降低。（表 3.5，圖 3.4）這提示 Omi/HtrA2 缺失引起小鼠骨骼肌組織中的線粒體數(shù)目減少。表 3.5 實(shí)時(shí)定量 PCR 測(cè)定 PGC-1α 基因擴(kuò)增 Ct 值目的基因 Ct 值 內(nèi)參基因 基因表達(dá)差異Ct-1 Ct-2 Ct-3 Ct平均值18s RNA2-ΔΔCt


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