目的探討硫化氫對(duì)燒傷大鼠血清干預(yù)培養(yǎng)表皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響方法探究對(duì)象選取新生1天的乳大鼠背部表皮提取的表皮細(xì)胞。研究分組分為三組。選取健康SD大鼠（雌雄不分）52只,正常喂養(yǎng)至350-400g后禁食24小時(shí),選取10只健康SD大鼠（雌雄不分）,于無(wú)菌條件下腹主動(dòng)脈取血,選取離心提取的血清作為正常對(duì)照組備用;燒傷造模處理18h后的42只SD大鼠（雌雄不分）提取的血清作為燒傷實(shí)驗(yàn)組備用。燒傷實(shí)驗(yàn)組再分成兩組,即燒傷對(duì)照組和燒傷干預(yù)組（外源性NaHS干預(yù)組）。在干預(yù)培養(yǎng)過(guò)程中,正常對(duì)照組與燒傷對(duì)照組分別制備成10%正常、10%燒傷大鼠血清培養(yǎng)基,燒傷干預(yù)組制備成10%燒傷大鼠血清培養(yǎng)基,并加入濃度為200μmol/L的NaHS。表皮細(xì)胞分別通過(guò)三組的培養(yǎng)基體外培養(yǎng)1h、6h、12h、24h。于細(xì)胞培養(yǎng)的1h、6h、12h后,采取RT-PCR檢測(cè)表皮細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的JNK、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、鈣網(wǎng)蛋白（calreticulin,CRT）及caspase-12的mRNA相對(duì)表達(dá)水平,于細(xì)胞培養(yǎng)的24h后采用Western Blotting印跡法檢測(cè)磷酸后JNK、GRP78、C... 

【文章來(lái)源】：青海大學(xué)青海省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

熔解曲線

圖 2.2 擴(kuò)增曲線5.6 Western Blotting 法實(shí)驗(yàn)過(guò)程5.6.1 原理Western Blotting 技術(shù)是將提取的蛋白質(zhì)樣本，通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳，Maker 電泳條帶分子量的大小選擇目的條帶，轉(zhuǎn)移到 PVDF 等載體上，利原抗體反應(yīng)孵化目的蛋白的檢測(cè)技術(shù)。5.6.2 實(shí)驗(yàn)步驟1)玻璃板準(zhǔn)備：用水清洗玻璃板，雙蒸水沖洗兩遍，烘干機(jī)烘干。將烘干的玻璃板在架子上，注入雙蒸水，5min 后觀察是否漏水。

個(gè)實(shí)驗(yàn)組體外培養(yǎng)的表皮細(xì)胞裂解后提取g 印跡法檢測(cè)，記錄試驗(yàn)結(jié)果，通過(guò)軟件計(jì)算3.2.1，圖 3.2.1：表 3.2.1 不同實(shí)驗(yàn)組表皮細(xì)胞體外培養(yǎng) 24h 后灰CRT Caspase-12 JNK:上 組 0.50±0.03 1.06±0.51 1.18±0.19 組 0.58±0.05 2.01±0.45 1.50±0.22 組 0.46±0.08 1.27±0.22 0.75±0.31 5.53 7.29 11.70 <0.05 <0.05 <0.05

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]硫化氫對(duì)大鼠腸缺血∕再灌注損傷中腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡的影響[J]. 朱仁武,顧葉春,張煜程,姜陽(yáng)貴,戴雍月.  中華全科醫(yī)學(xué). 2016(08)
[2]硫化氫對(duì)深Ⅱ度燒傷大鼠創(chuàng)面巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響[J]. 李毅,徐東波,王洪瑾.  中華燒傷雜志. 2016 (07)
[3]硫化氫對(duì)1型糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用[J]. 楊銳,劉小粉,馬善峰,高琴,李正紅,賈強(qiáng).  中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2016(02)
[4]硫化氫對(duì)常見(jiàn)心血管疾病的保護(hù)作用及其機(jī)制[J]. 錢玲玲,劉曉宇,王如興.  臨床心血管病雜志. 2015(10)
[5]硫化氫對(duì)尼古丁誘導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及細(xì)胞凋亡的影響[J]. 林帆,陳亞紅,廖程程,孫云,白宇,廖藝璇,李敏霞,齊永芬.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2015 (28)
[6]急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 伍冬冬,潘頻華,覃慶武.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2015 (07)
[7]硫化氫活化ERK抵抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡[J]. 祝曉瑩,王桂美,胡敏,陸歡,鄧晶,嚴(yán)曉紅.  華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2015(03)
[8]硫化氫對(duì)急性肺損傷大鼠肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的調(diào)節(jié)[J]. 劉志偉,王海英,關(guān)嵐,趙斌.  中華急診醫(yī)學(xué)雜志. 2014 (08)
[9]JNK信號(hào)通路與細(xì)胞凋亡[J]. 傅應(yīng)亞,黎友倫.  重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(03)
[10]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子伴侶GRP78在大鼠缺血再灌注損傷肝臟中的表達(dá)[J]. 石印青,陳亮,任利,張洋,王海久,周瀛,侯立朝,樊海寧.  中國(guó)普通外科雜志. 2013(07)

博士論文
[1]硫化氫促進(jìn)不同缺血模型的血管新生及其機(jī)制研究[D]. 李娜.復(fù)旦大學(xué) 2014
[2]鈣網(wǎng)蛋白介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡參與心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷[D]. 徐菲菲.中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院 2009

碩士論文
[1]硫化氫對(duì)燒傷大鼠體外培養(yǎng)皮膚巨噬細(xì)胞MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路ERK、JNK及p38蛋白作用的影響[D]. 李興龍.青海大學(xué) 2017
[2]硫化氫改善慢性束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[D]. 曾洋.南華大學(xué) 2015
[3]硫化氫拮抗糖尿病大鼠海馬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和突觸障礙并上調(diào)海馬BDNF-TrkB通路[D]. 袁娟.南華大學(xué) 2015
[4]硫化氫抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激改善大鼠主動(dòng)脈血管鈣化[D]. 楊銳.河北醫(yī)科大學(xué) 2015
[5]鈣網(wǎng)蛋白調(diào)控的Ca2+信號(hào)途徑在應(yīng)力介導(dǎo)成肌細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制研究[D]. 賈萍萍.青島大學(xué) 2013
[6]p38和JNK在缺氧誘導(dǎo)體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞凋亡中的作用[D]. 劉敏.第四軍醫(yī)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3610093