研究背景骨關節(jié)炎（osteoarthritis,OA）常見于老年人,通常臨床上以關節(jié)軟骨退化并伴隨發(fā)生炎癥為特征的慢性疾病。MicroRNAs被定義為單鏈非編碼小分子RNA,其長度為18-24個堿基,大部分存在于基因間區(qū)域。越來越多的證據(jù)支持miRNAs對軟骨細胞凋亡、軟骨退化和關節(jié)炎的發(fā)病機制有著巨大的影響。目前研究已發(fā)現(xiàn)miR-138-5p參與軟骨表型和成骨調(diào)節(jié),可能是OA發(fā)生發(fā)展的重要因素。我們的此項研究旨在研究miR-138-5p與軟骨細胞異常凋亡以及炎性因子分泌的關系。此外,考慮到軟骨細胞凋亡與OA進展的密切關系,我們進一步研究miR-138-5p與OA發(fā)生發(fā)展的中的作用。研究目的本文希望通過對miR-138-5p在IL-1β誘導的軟骨組織細胞CHON-001和ATDC 5中表達水平差異進行研究,進而對IL-1β誘導的人軟骨細胞炎性損傷的機制作用進行研究,希望能夠為OA提供新的治療目標并提供研究材料。研究方法（1）首先用不同濃度IL-1β誘導ATDC5和CHON-001軟骨細胞,檢測對軟骨細胞的增殖、遷移的影響,以及對相關炎癥因子、凋亡蛋白的影響。（2）我們收集了 30例OA... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖３－１?ｍｉＲ－１３８－５ｐ在ＯＡ軟骨中和模擬ＩＬ－ｌ?ｆＢ表達誘導的炎癥損傷情況下，ｍｉＲ－１３８－５ｐ在??ＣＨＯＮ－００１和ＡＴＤＣ５細胞中下調(diào)

ｍｐａｎｙ）測定熒光素酶活性。??４．３．８統(tǒng)計方法??采用ＧｒａｐｈＰａｄ?Ｐｒｉｓｍ?６．０軟件進行統(tǒng)計，數(shù)據(jù)采用單因素方差進行統(tǒng)計學分??析，Ｐ＜０．０５為統(tǒng)計學意義差異。??４．４實驗結(jié)果??４．４．１?ｍｉＲ－１３８－５ｐ?能夠靶向?ＳＯＸ９?基因??為了探索ｍｉＲ－１３８－５ｐ與ＳＯＸ９的關系，我們利用生物信息學方法預測了??ｍｉＲ－１３８－５ｐ的可能靶向，然后構(gòu)建了?ＳＯＸ９?３’－ＵＴＲ－ｍｕｔ熒光素酶報告基因和??ＳＯＸ９?３’－ＵＴＲ－ｗｔ熒光素酶報告載體（見圖４－１Ａ）。圖４－２Ｂ所示，ＳＯＸ９??３’－ＵＴＲ－ｍｕｔ轉(zhuǎn)染組的ＳＯＸ９表達無明顯改變，而轉(zhuǎn)染ＳＯＸ９?３’－ＵＴＲ－ｗｔ的細胞??組的ＳＯＸ９表達明顯降低。這說明ＳＯＸ９是ｍｉＲ－１３８－５ｐ的靶向。??Ａ?ＳＯＸ＾ＵＴＲ－ｗｔ：?５＇?ＣＵＧＵＧＣＣＵＣＵＣＡＧＭＣＡＣＣＡＧＣＡ．?３＇?ＳＯＸ９－３＊ＵＴＲ－ｗｔ：?５＇．．?ＣＵＧＵＧＣＣＵＣＵＣＡＧＡＡＵＡＣＣＡＧＣＧ．．．３，??ｌｌｌｌｌｌｌ?ｌｌｌｌｌｌｌ??ｈｓａ－ｍｉＲ－１３８－５ｐ?３＊?ＧＣＣＧＧＡＣＵＡＡＧＵＧＵＵＧＵＧＧＵＣＧＡ?５＇?ｍｍｕ－ｍｉＲ－１３８－５ｐ?３＇?ＧＣＣＧＧＡＣＵＡＡＧＵＧＵＵＧＵＧＧＵＣＧＡ?５＇??Ｉ?ＩＩ?Ｉ?ＩＩ??ＳＯＸ９－３＊ＵＴＲ－ｍｕｔ?５＇?．．．ＣＵＧＵＧＣＣＵＣＵＣＡＧＭＧＡＧＧＡＧＧＡ．?．３＊?ＳＯＸＳ－＾ＵＴＲ－ｍｕｔ：?５＊．．?ＣＵＧＵＧＣＣＵＣＵＣＡＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＡ?．３＇??Ｂ?ＣＨＯＮ－００１??餐?■?ｍｉＲ－１３５－５ｐｍｉｍＪＣＳ?ＡＴＤＣ５?■?ｍｆＲ－１３８－５ｐｍｆｍ？

５?ｃｅｌｌｓ??ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｍｉＲ－１３８－５ｐ?ｍｉｍｉｃ．??４．４．３?ｓｉ－ＳＯＸ９抑制軟骨細胞ＣＨＯＮ－ＯＯｌ和ＡＴＤＣ５的增殖??我們使用?ｓｉ－ｃｏｎｔｒｏｌ、ｓｉ－ＳＯＸ９、ｍｉＲ－１３８－５ｐ－ｉｎ?和?ｍｉＲ－１３８－５ｐ－ｉｎ／ｓｉ－ＳＯＸ９?轉(zhuǎn)??染ＣＨＯＮ－ＯＯｌ和ＡＴＤＣ．?５細胞系，然后使用ＣＣＫ８檢測細胞系的細胞活力。結(jié)??果發(fā)現(xiàn)，ｍｉＲ－１３８－５ｐ－ｉｎ轉(zhuǎn)染的細胞具有最高的細胞活力，而ｓｉ－ＳＯＸ９則具有最??低的細胞活力（圖４－３）。??ＣＨＯＮ－００１??１?Ｖ?＋?ＳｌＣｏ＿?｜?ＡＴＤＣ５?Ｔ?＋?ｓ？．Ｃ〇ｎｔｆ〇ｌ??ｇ?０?８－?ｉ?－＊？?ＳＩ－ＳＯＸ９?８?０１?？?ｓｉ－ＳＯＸ９??§０６－?＾?ｍｉＲ－１３８＇５ｐ－ｉｎ?ｇ〇６．?ｉ?－＊?ｍ．Ｒ－１３８－５ｐ－ｉｎ??；?ｍｉＲ－１３８－５ｐ－？ｎ／ｓｔ－ＳＯＸ９?；?Ｉ?ｍｉＲ－１３８－５ｐ－ｉｎ／ｓｉ－ＳＯＸ９??＾０．２－??〇?ｏ??°〇．〇－ｌ?．?．?．—?°〇．〇－ｌ?．?１?１—??０?２４?４８?７２?０?２４?４８?７２??Ｔｉｍｅ（ｈｏｕｒｓ）?Ｔｉｍｅ（?ｈｏｕｒｓ）??圖４－３ｓｉ－ＳＯＸ９抑制軟骨細胞系ＣＨＯＮ－ＯＯｌ和ＡＴＤＣ５增殖??用?ＣＣＫ－８?法檢測?ｓｉ－ｃｏｎｔｒｏｌ、ｓｉ－ＳＯＸ９、ｍｉＲ－ｎ８＿５ｐ－ｉｎ?和?ｍｉＲ－１３８－５ｐ－ｉｎ／ｓｉ－ＳＯＸ９?對?ＣＨＯＮ－００１??和八�。埃�?５細胞增殖的影響。＊＊？＜０．０１。??Ｆｉｇｕｒｅ?４－３?Ｓｉ－ＳＯＸ９?ｉｎｈｉｂｉｔｓ

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3610182